未成熟胚培養技術,可克服遠緣雜交不親和的障礙,克服不成活胚,克服種子休眠, 促使產生擬狀胚之癒合組織,加速種子發芽,縮短育種時間,而細胞懸浮培養及原生 質體的分離、培養與融合等技術,不但可誘導,因此利用胚培養、細胞懸浮培養及原 生質體融合等組織培養技術,進行品種改良,是目前先進國所最熱衷的育種技術。而 作物的基因型、未成熟胚的年齡,癒合組織的質地,懸浮細胞的建立、原生質體的分 離及培養等均為此種技術能否成功的重要因素。本試驗以玉米未成熟胚為培植體,探 討影響癒合組織形成與再生之因子,並建立細胞懸浮培養以此做為原生質體分離、培 養之研究。所得之結果如下: 1﹒接種時,以子葉盤平放,胚軸朝下所誘導之癒合組織較佳,且百分率較高。 2﹒甜玉米F ﹣13自交箹,以3∼5%蔗糖所誘導之癒合組織質地較佳,而7%蔗 糖未成熟胚直接形成植物體。 3﹒飼料玉米TA2808﹣76自交系,以1%蔗糖之癒合組織誘導率最佳,隨著蔗 糖濃度增加而易使未成熟胚直接形成植物體。 4﹒不同自交系所誘導之癒合組織質地,顏色不盡相同。其中以屬甜玉米之三自交系 F ﹣13,BT﹣1225,BT﹣1057所誘導之癒合組織質地較佳。 5﹒癒合組織以30℃黑暗下培養,生長最快且分化率較高達80%而25℃達60 %,35℃則易褐化,且形成不正常的根。 6﹒癒合組織之生長曲線,極為平均,約培養30天後開始褐化,在此期間內必須進 行繼代培養。 7﹒以不切碎癒合組織所建立之懸浮細胞,外觀較佳,且分泌物少。 8﹒細胞懸浮培養之建立,以含3ppm 2,4﹣D ,3%蔗糖,1∕2∼1∕4N6 無機鹽類之培養基較佳。 9﹒1∕2∼1∕4N 無機鹽類之懇浮細胞生長曲線,經12∼13天可達緩慢生 長期(stationary phase),所以繼代培養以早於此時期為佳。 4 -1 10﹒利用癒合組織行原生質體分離平均可獲得8×10 protoplast g 。若以懸 浮細胞為材料所獲得之原生質體為懸浮細胞之60%。 11﹒原生質體培養後第三天已可看到細胞壁形成,培養42天可達0﹒5∼1mm的 細胞團,移至Agarose 固體培養基可長成microcallus 。
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