臺灣博碩士論文加值系統

菟絲子，為常用的中藥藥材之一，其主要功效為補腎養肝，是良好的滋補中藥材。然而，關於其調節免疫功能機轉的研究却相當地少。樹突細胞對於免疫反應的調控，扮演了十分重要的角色，因此樹突細胞被認為是研究免疫系統調節的主要目標。本論文利用小鼠骨髓分化的樹突細胞做為測試平台，以觀察中國菟絲子對於樹突細胞活化的影響。先前實驗結果發現，中國菟絲子的甲醇粗萃取物，可誘導樹突細胞產生促發炎的細胞激素。另外，菟絲子甲醇粗萃取物經不同極性的溶劑進行分配分離後得到四個分離層的萃取物，隨後進一步測試發現，其中正丁醇與90％甲醇分層萃取物，對於LPS誘發成熟的樹突細胞，具有抑制的活性，然而，水分層具有活化樹突細胞的活性。本研究主要目的為確認正丁醇分層萃取物中，影響樹突細胞活化的主要成份為何，我們利用正相的開放式層析管柱，以及逆相的碳18管柱的半製備型高壓液相層析儀，分離純化其中化合物，配合樹突細胞的活性分析，我們得到了三個具影響樹突細胞的成份。此三種成份經過影響樹突細胞的研究發現，其中quercetin-3-O- apiosyl-(1→2)-galactoside與 kaempferol-3-O- galactoside可抑制樹突細胞，而chlorogenic acid
則是可促進樹突細胞的活化。

Seeds of Cuscuta chinensis, also known as Cuscutae Semen and Tu-Si-Zi, is one of the commonly used Chinese medicinal materials. It has been used as a tonic for nourishing the liver and kidneys. However, the immunoregulatory effect of Cuscutae Semen is rarely studied. Dendritic cells (DCs) play a critical role in initiating immune response. Thus, DCs are regarded as a major target of immunomodulator for controlling immune responses. In this study, we examined the effect of Cuscutae Semen on mouse bone marrow-derived DC activation. We found that the methanol extract of Cuscutae Semen (MECS) induced the pro-inflammatory cytokine production. Also, the n-butanol and 90% methanol layers of the fractionation of MECS potentially suppressed LPS-induced DC activation, while the water layers of the fractionation of MECS potentially promoted DC activation. To identify the active ingredients, we purified compounds from n-butanol layer by using positive phase open column and reverse phase C18 column-HPLC equipment. Three compounds were found and their immunoregulatory effects were further examined. Our results showed that two of them(quercetin-3-O-apiosyl-(1→2)-galactoside, kaempferol-3-O- galactoside) suppressed DC, while the other one( chlorogenic acid
) promoted DC activation.

中文摘要…………………………………………………………………I
英文摘要…………………………………………………….…………..II
縮寫表………………………………………………………………..…III
目錄……………………………………………………………………..IV
圖表目錄…………………………...…………………………..……….VI
第一章 前言…………………………………………………..………..1
第二章 實驗材料、儀器與方法…………………………..….………..17
第一節 實驗材料 ……………………………...…………………...17
第二節 實驗儀器…………………………………………………....18
第三節 實驗方法…………………………….…………………..….19
第三章 實驗結果……………………………………..……………..26
第一節 菟絲子之化學成分分離、純化與鑑定……………………26
第二節 抑制樹突細胞活性的分析……………………………..…..30
第三節 細胞激素表現量的偵測………………………..…………..31
第四節 用HPLC偵測水層分離物………………………………….31
第五節 細胞毒殺活性的偵測……………….…..………………….32
第六節 基因體核酸片段化(DNA fragmentation)的偵測……….....32
第七節 Kaempferol與CCBE5-2、Quercetin與CCBE10-2的比較..32
第四章 討論………………..………………………………………....34
參考文獻…………………………………………….……...…………..69
中文部份……………………………………………………..…………69
英文部份………….…………….………………………………………71

中文部份
1.黃爽。神農本草經。中醫古籍出版社，1982，p.62。
2.金曉，李家實，閻文玫。菟絲子黃酮類成分的研究。中國中藥雜誌，1992，17(5)：292。
3.顧立剛，葉敏。菟絲子金絲桃乾體內外對小鼠免疫細胞功能的影響。中國中醫藥信息雜誌，2001，11(8)：42-44。
4.楊濤，梁康，侯緯敏，張昌穎。四種中草藥對大鼠半乳糖性白內障相關活性的影響。生物化學雜誌，1991，7(6)：731。
5.楊寧蓀。建立抗發炎和增強免疫力的中草藥篩選平台。中醫藥年報，2005，23(5)：235-264。
6.葉敏，閻玉凝，倪雪梅，喬梁。菟絲子全草化學成分的研究。中藥材，2010，(05) ：339-341。
7.甘偉松。藥用植物學。國立中國醫藥研究所，1969，p.460 。
8.陳芸。以樹突細胞為主的免疫療法在器官移植的應用。國立台灣大學臨床醫學研究所博士論文，2007，p. 5-6。
9.廖國媖、蔡進來、陳明義。台灣產菟絲子屬植物之研究。台灣省立博物館年刊，1991，34： 103-119。
10.張慶平，石森林。菟絲子對小鼠免疫功能影響的實驗研究。浙江臨床醫學，2006 ，8(6)：568-569。
11.郭澄，蘇中武，李承。中藥菟絲子保肝活性的研究。時珍國藥研究，1992，3(2)：62-64。
12.郭澄，翰公羽，蘇中武。南方菟絲子化學成分的研究。中國藥學，1997，32 (1)：8-11。
13.楊遠波，劉和義，呂勝由。台灣維管束植物簡誌。行政院農委會，1999，(4)：101。
14.蔡曦光，許愛霞，葛斌，高湘，楊社華。菟絲子多糖抑制衰老小鼠模型中氧自由基域的作用。第三軍醫大學學報，2005，27(3)：1326-1328。
15.彭守靜，陸仁康，俞麗華，王福楠。菟絲子、仙茅、巴戟天對人精子體外運動和膜能影響的研究。中國中西醫結合雜誌，1997，17(3)：145-147。


英文部份
1.Anis E, Anis I, Ahmed S, Mustafa G, Malik A, Afza N, Hai SM, Shahzad-ul-hussan S, Choudhary MI. Alpha-glucosidase inhibitory constituents from Cuscuta. Chem Pharm Bull. 2002, 50 (1):112-115.
2.Bao X, Wang Z, Fang J, Li X. Structural features of an immunostimulating and antioxidant acidic polysaccharide from the seeds of Cuscuta chinensis. Planta Med . 2002, 68(3):237-239.
3.Beutler B. TNF, immunity and inflammatory disease: lessons of the past decade. J Invest Medicine. 1998, 43: 227-235.
4.Groves RW, Schmidt-Lucke AJ. Recombinant human GM-CSF in the treatment of poorly healing wounds. Adv Skin Wound Care. 2000, 13:107-112.
5.Hogge GS, Burkholder JK, Culp J, Albertini MR, Dubielzig RR, Yang NS, Mac Ewen EG. Preclinical development of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transfected melanoma cell vaccine using established canine cell lines and normal dogs. Cancer Gene Ther. 1999, 6: 26-36.
6.Huang RY, Yu YL, Cheng WC, OuYang CN, Fu E, Chu CL.Immunosuppressive effect of quercetin on dendritic cell activation and function. J Immunol. 2010 ,184(12):6815-21.
7.Li, G.S., Chen, Y.Y., Li, S.C. Immunological activity of watery extract from Cuscuta australis. Chinese Journal of Traditional Chinese Medical Science and Technology. 1997, 4: 256-258.
8.Lin MK, Yu YL, Chen KC, Chang WT, Lee MS, Yang MJ, Cheng HC, Liu CH, Chen DC, Chu CL. Kaempferol from Semen Cuscutae attenuates the immune function of dendritic cells. Immunobiology. 2011 May 27. In press.
9.Oh H, Kang DG, Lee S, Lee HS. Angiotensin converting enzyme inhibitors from Cuscuta japonica Choisy. J Ethnopharmacol. 2002, 83(1-2):105-8.
10.Pan HJ, Sun HX, Pan YJ. Adjuvant effect of ethanol extract of Semen Cuscutae on the immune responses to ovalbumin in mice. Journal of Ethnopharmacol. 2005, 99-103.
11.Xiang SX. The chemical constituents from the seeds of Cuscuta japonica. Chin J Chem. 2001, 19(3):282-285.
12.Yang L, Chen Q, Wang F, Zhang G. Antiosteoporotic compounds from seeds of Cuscuta chinensis. J Ethnopharmacol. 2011, 135(2):153-6.
13.Ye M, Li Y, Yan Y, Liu H, Ji X. Determination of flavonoids in Semen Cuscutae by RP-HPLC . Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2002, 28: 621-628.
14.Yuncker T. G. Nomenclatural changes in the genus Cuscuta and notes on some American species. Memoirs of the Torrey Botanical Club. 1932, 18: 113-331.
15.Zhang H, Jiao Q, Gong Q, Zhang Y, Zhang W, Hu Z. Baicalin induced dendritic cell apoptosis in vitro. Front Pharmacol. 2011 , 2:15.