臺灣博碩士論文加值系統

本研究共蒐集42種藥用植物(包含民間用藥植物)，其中29種以50%乙醇溶液浸出，萃取其粗萃物為有效性成分，物種包含荊芥、黃柏、大黃、野筧、牛公刺、丁豎朽、防風、黃鵪菜、蛇床子、白花蜈蚣、苦蔘、水丁香、兔兒菜、蘭嶼羅漢松、小葉羅漢松、紫背草、廣藿香、水黃皮、苦楝、啤酒花、菟絲子、過山香葉、九尾草、南非葉、紫色小檗葉、非洲白蔘、左手香、芳香萬壽菊，東哥阿里。另13種植物，以自行設計的水蒸餾套組萃取其精油及純露，物種包含麻豆文旦、紅柚、白柚、牛樟木、小葉樟，月桃(種子與塊莖)、白千層、橘子、檸檬、澳洲茶樹、香茅、甜肉桂、薑黃。總計共42種植物，透過紙錠擴散抑菌圈試驗、最低抑菌濃度、最低殺菌濃度等in vitro測試的方式，測試各萃取物與精油(或純露)，對皮屑芽孢菌(BCRC 22243)的抑菌能力，以利日後做為抗皮屑芽孢菌的產品原料來源。
紙錠擴散抑菌圈測試，25%非洲白蔘乙醇粗萃物抑菌圈為23.3mm(±0.3)，50%麻豆文旦皮精油抑菌圈為20.0mm(±0.2)，50%麻豆文旦葉精油抑菌圈為18.5mm(±0.3mm)， 50%牛樟木精油抑菌圈為19.9mm(±0.6mm) ，此4個物種在抑菌圈測試後的結果具有高度抑菌活性。
以上四物種以單一成分進行最低抑菌濃度(MIC)測試，其有效濃度分別為非洲白蔘0.6mg/ml、麻豆文旦皮精油0.4µl/ml、麻豆文旦葉精油0.4µl/ml、台灣牛樟木精油2.5µl/ml。
將非洲白蔘與麻豆文旦皮精油，以單一成分進行兩分鐘殺滅90%菌數的最低殺菌濃度(MBC)測試，其有效濃度分別為非洲白蔘 4mg/ml、麻豆文旦皮精油4µl/ml。將非洲白蔘以0.8mg/ml與麻豆文旦皮精油2mg/ml進行MBC複配試驗時，對皮屑芽孢菌仍能得到兩分鐘殺滅96.03%的殺菌效果。
以Trypan blue染色進行傷害機制探討，重複兩分鐘MBC試驗濃度，並以染劑進行染色10分鐘，發現非洲白蔘萃取物與文旦皮精油兩物質做殺菌反應後，染劑皆進入微生物細胞膜內著色，表示兩物質的傷害機制可能屬於細胞膜干擾方式。
依MBC複配濃度調製洗髮精，在In vivo抗頭皮屑試驗，五位受測者頭皮於連續四天後，總體皮屑改善程度為38.02%。

In vitro evaluation of anti-bacteria for 42 medical plants with Agar Disc Diffusion method, Minimum Inhibition Concentration test (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) method. 29 medical plants: Schizonepeta tenuifolia, Phellodendron amurense, Rheum Palmatum, Wild Kakehi, Paliurus ramosissimus, Elephantopus mollis, Saposhnikovia divaricata, Youngia japonica, Cnidium monnieri, Ajuga taiwanensis, Sophora flavescens, Ludwigia octovalvis, Lantana Camara Linn., podocarpus costalis presl, Podocarpus macrophyllus, Emilia sonchifolia, Pogostemon cablin, Pongamia pinnata, Melia azedarach Linn, Humulus Iupulus L, Cuscuta chinensis Lam, Clausena excavata Burm,Setaria viridis, Vernonia amygdalina, Berberis thunbergii cv.atropurpurea, Modia whitei(Hook. f.) Skeels, Coleus amboinicus Lour, Tagetes lemmonii, Eurycoma longifolia extracted by 50% ethanol solution. The essential oil of Citrus grandis, Red pummelo, Citrus grandis cv, Cinnamomum kanehirae, Cinnamomum brevipedunculatum, Alpinia zerumbet, Melaleuca leucadendra, Citrus reticulate, Citrus limon Brum, Melaleuca alternifolia cheel, Cymbopogon, Cinnamomum cassia, Curcuma longa are distilled by self-designed device.
Evaluation those herbal extracts for anti dandruff activity,and applied to cosmetics material in future.
Based on zone inhibition test, four extracts have height antibacterial activity. The diameter of zone of Mondia Whitei extract with 50% ethanol is 23.3mm (±0.3); Those of peel of Citrus grandis essential oil is 20.0mm(±0.2); Those of leaves of Citrus grandis essential oil is 18.5mm(±0.3mm); Cinnamomum kanehirae essential oil is 19.9mm(±0.6mm).
The MIC of those four plants is Mondia Whitei 0.6mg/ml, the peel of Citrus grandis essential oil 0.4µl/ml, the leaves of Citrus grandis essential oil 0.4µl/ml, and Cinnamomum kanehirae essential oil 2.5µl/ml.
The MBC 90% bactericidal Malassezia furfur for Mondia Whitei and peel of Citrus grandis essential oil is 4mg/ml and 4µl/ml in two minutes. Combination of 0.8mg/ml Mondia Whitei and 2µ/ml the peel of Citrus grandis essential oil can reach 96.03% bactericidal effect.
Repeat MBC test for Mondia Whitei and Citrus grandis agent, Trypan blue pendtrate the membrane of dead malassezia furfur in 2 minutes.
In vivo anti-dandruff test, five volunteer treated with shampoo and complex at MBC concentration every day. The overall improvement rate of four day treatment is 38.02%.

摘要……………………………………………….........…………………...….Ⅰ
Abstract………………………………………………………….........………..Ⅲ
第一章 緒論……………………………...………………….........…………..1
1-1 前言........................................................................................................1
1-2 研究動機................................................................................................3
1-3 實驗架構................................................................................................4
第二章 文獻回顧.................................................................................................5
2-1中草藥歷史淵源與運用........................................................................5
2-2中草藥於皮膚上的運用.......................................................................7
2-3中草藥於化妝品運用的前瞻性...........................................................7
2-4皮膚與微生物的關聯...........................................................................9
2-5 Malassezia furfur的in vitro培養條件................................................11
2-6藥用植物萃取液對Malassezia的抑制能力......................................12
2-7藥用植物簡介......................................................................................15
2-8藥用植物萃取方法探討......................................................................32
2-9精油萃取技術探討..............................................................................34
2-10目標菌株的培養與生長測定.............................................................37
2-11抗菌試驗的方法................................................................................41
2-12植物組織培養 Plant Tissue Culture.................................................48
第三章 實驗方法與步驟...................................................................................53
3-1 42種藥用植物實驗物種收集.............................................................55
3-2非洲白蔘無菌苗組培與扦插..............................................................57
3-3藥用植物萃取方法..............................................................................65
3-4精油萃取裝置與萃取方法步驟..........................................................72
3-5非洲白蔘油相物水相物分層萃取......................................................77
3-6 Malassezia furfur培養基製作.............................................................78
3-7菌種復育培養與菌濃度測定..............................................................83
3-8紙錠擴散試驗Agar Disc Diffusion Test抑菌圈測試方法...............86
3-9最低抑菌濃度試驗方法......................................................................91
3-10最低殺菌濃度試驗方法.....................................................................99
3-11傷害機制探討Trypan blue染色.....................................................103
3-12抗頭皮屑洗劑設計與調製...............................................................106
3-13 In vivo人體抗頭皮屑試驗.............................................................108
第四章 實驗結果與討論.................................................................................111
4-1非洲白蔘培養結果............................................................................112
4-2麻豆文旦萃取率結果........................................................................116
4-3 非洲白蔘乙醇萃取物分離油相物水相物結果...............................117
4-4 Malassezia furfur培養與鑒定...........................................................118
4-5抑菌圈測試確效掃描結果................................................................125
4-6最低抑菌濃度結果MIC...................................................................139
4-7最低殺菌濃度試驗結果MBC..........................................................152
4-8 Trypan blue Malassezia furfur染色結果..........................................160
4-9 In vivo 抗頭皮屑試驗結果...............................................................162
第五章 結論.....................................................................................................170
第六章 參考文獻............................................................................................172.

Abobkar I. M. Saad and Ahmed M. Elshahed (2012). Plant tissue culture Media, In: Annarita Leva and Laura M. R. Rinaldi(Eds), Recent Advances in Plant in vitro Culture(p.29-40), InTech.
Adetunji C. O., Olaniyi O.O. and Ogunkunle A.T.J(2013). Bacterial activity of crude extracts of Vernonia amygdalina on clinical isolates, Journal of Microbiology and Antinicrobials，Vol.5(6): p.60-64..
Cafarchia C, Gasser RB, Figueredo LA, Latrofa MS, Otranto D.( 2011). Advances in the identification of Malassezia. Mol Cell Probes; Vol.25:p1-7. concentrations. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 48, Suppl. S1:
Donald Orth (1993). Handbook of cosmetic microbiology. New Yor: Marcel Dekker, Inc.
E.F. George and G-J. de Klerk (2008). The Components of Plant Tissue Culture Media I: Macro- and Micro- Nutrients. In: Edwin F. George, Michael A. Hall, Geert-Jan De Klerk(Eds). Plant Propagation by Tissue Culture: p65-113. Springer Netherlands.
European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST)of the European Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases(ESCMID) ( 2000), Determination of minimum inhibitory concentrations (MICs) of antibacterial agents by agar dilution，Eucast definitive document e.def 3.1.
Faisal GG., Zakaria SM., Najmuldeen GF(2015). In Vitro Antibacterial Activity of Eurycoma Longifolia Jack (Tongkat Ali) Root Extract, The international medical journal Malaysia, Vol 14 No 1.
Georgios Gaitanis, Prokopios Magiatis, Markus Hantschke, Ioannis D. Bassukas,a and Aristea Velegrakid(2012). The Malassezia Genus in Skin and Systemic Diseases. Clinical Microbiology Reviews. Vol 25 No 1: p106-141
Idayat Titilayo Gbadamosi, Sakiru Morenikeji Erinoso(2015). In Vitro Antioxidant and Antimicrobial Activities of Mondia whitei(Hook. f.) Skeels. Journal of Basic & Applied Sciences, 11: p428-433
Inamadar A. C., Palit A(2003). The genus Malassezia and human disease . Indian J Dermatol Venereol Leprol;69:p265-70
Jennifer M. Andrews(2001). Determination of minimum inhibitory
K. Asada(1987). Active Oxygen (in Japanese); Kyoritsu Press:p23-40.
Koichi Makimura, Yoshiko Tamura, Michinarikudo, Katsuhisa Uchida, Hiuga Saito and Hideyo Yamaguchi (2000). Species identification and strain typing of Malassezia species stock strains and clinical isolates based on the DNA sequences of nuclear ribosomal internal transcribed spacer 1 regions. J. Med. Microbiol. Vol. 49, p29–35.
Kubo I, Muroi H, Himejima M(1992). Antibacterial activity of totarol and its potentiation. J Nat Prod.55(10): p1436-1440.
Kyu Joong Ahn, H.Ruth Ashbee(1996). Determination of Mininum Inhibitory Concentrations of Several Azole Antifungals for Malasszia fur fur. Annals of Dermatology Vol.8 No.3.
Letasiová Silvia , Jantová S , Cipák L , Múcková M(2006). Berberine antiproliferative activity in vitro and induction of apoptosis/necrosis of the U937 and B16 cells. Cancer Lett. 239(2): p254-62.
Lévy A., Feuilhade de Chauvin M, Dubertret L, Morel P, Flageul B(2007). Malassezia folliculitis: characteristics and therapeutic response in 26 patients. Ann Dermatol Venere; 134(11): p823–828.
M. Nazzaro Porro,S. Passi,F. Caprilli,P. Nazzaro,G. Morpurgo(1976). Growth requirements and lipid metabolism of Pityrosporurn orbiculare. J Invest Dermatol. 66: p178–182.
Marianne Hald, Maiken C. Arendrup, Else L. Svejgaard, Rune Lindskov, Erik K. Foged and Ditte Marie L. Saunte(2015). Evidence-based Danish Guidelines for the Treatment of Malasseziarelated Skin Diseases, Acta Derm Venereol; 95: p12–19
Mario J. Marcon, Dwight A. Powell(1992). Human Infections Due to Malassezia spp. Clinical microbiology reviews. Apr. p101-119,.
Masahiro Ota, Mineyuki Yokohama(2010). Chapter 3.11 Chemistry of osmetics. In: Lewis Mander, Hung-Wen Liu(Eds). Comprehensive Natural Products 2 Chemistry and Biology:10 Volume Set .p317-349. Boston ,Newnes.
Murashige T., Skoog F(1962). A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 15:p473-97
Parsad D, Negi KS(1999). Short term treatment of pityrosporum folliculitis with itraconazole. Indian J Dermatol Venereol Leprol. 65(3); p122–123.
Shaheed Ur Rehman, Kevin Choe and Hye Hyun Yoo (2016). Review on a Traditional Herbal Medicine,Eurycoma longifolia Jack (Tongkat Ali):Its Traditional Uses, Chemistry, Evidence-Based Pharmacology and Toxicology，Molecules, 21(3): p331.
T. Thorpe, C. Stasolla, E.C. Yeung, G-J. de Klerk, A. Roberts and E.F. George(2008). The Components of Plant Tissue Culture Media II: Organic Additions, Osmotic and pH Effects, and Support Systems. In: Edwin F. George, Michael A. Hall, Geert-Jan De Klerk(Eds), Plant Propagation by Tissue Culture: p115-173. Springer Netherlands.
Takamasa Kaneko, Koichi Makimura, Masanobu Onozaji(2005). Vital growth factors of Malassezia species on modified CHROMagar Candida. Medical Mycology. 43: p699-704..
Vinterhalter D, Vinterhalter BS(1997). Micropropagation of Dracaena sp. In: Bajaj YPS (ed.) Biotechnology in agriculture and forestry volume 40, High-tech. and Micropropagation VI : p131-146. Berlin Heidelberg: Springer.
Zoltán Molnár, Emese Virág, Vince Ördög(2011). Natural substances in tissue culture media of higher plants, Acta Biologica Szegediensis, Vol 55(1): p123-127.

中國植物志(1984)。第53(1)卷 54頁，白千層，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Melaleuca%20leucadendron
中國植物誌(1977)。第65(2)卷 268頁，荊芥，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Schizonepeta%20tenuifolia
中國植物誌(1977)。第66卷370頁，廣霍香，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Pogostemon%20cablin
中國植物誌(1978)。 第7卷419頁，小葉羅漢松，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Podocarpus%20brevifolius
中國植物誌(1978)。第7卷418頁，蘭嶼羅漢松，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Podocarpus%20costalis
中國植物誌(1979)。第64(1)卷145頁，菟絲子，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Cuscuta%20chinensis
中國植物誌(1981)。第16(2)卷 62頁，薑黃，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Curcuma%20longa 2016/5/17
中國植物誌(1982)。第31卷223頁，甜肉桂，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Cinnamomum%20cassia
中國植物誌(1982)。第48(1)卷128頁，牛公刺，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Paliurus%20ramosissimus
中國植物誌(1984)。第53(1)卷55頁，細花白千層，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Melaleuca%20parviflora
中國植物誌(1990)。第10(1)卷337頁，狗尾草，檢索日期2016年5月17日 http://www.floraofchina.org/frps/Setaria%20palmifolia
中國植物誌(1994)。第40卷183頁，水黃皮，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Pongamia%20pinnata
中國植物誌(1994)。第40卷81頁，苦蔘，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Sophora%20flavescens
中國植物誌(1997)。第43(2)卷128頁，過山香，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Clausena%20excavata
中國植物誌(1997)。第43(2)卷193頁，檸檬，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Citrus%20limon
中國植物誌(1997)。第43(2)卷201頁，柑橘，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Citrus%20reticulata
中國植物誌(1997)。第43(3)卷100頁，苦楝，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Melia%20azedarach
中國植物誌(1997)。第80(1)卷 251頁，兔兒菜，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Ixeridium%20chinense
中國植物誌(1997)。第80(1)卷155頁，黃鵪菜，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Youngia%20japonica
中國植物誌(1999)。第77(1)卷324頁，紫背草，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Emilia%20sonchifolia
中國植物誌(2000)。第53(2)卷 29頁，水丁香，檢索日期2016年5月17日 http://frps.eflora.cn/frps/Ludwigia%20octovalvis。
中國藥典(2015)。第一部，23-24，大黃，檢索日期2016年5月17日 http://www.drugfuture.com/Pharmacopoeia/CP2015-1/23-24.pdf
中國藥典(2015)。第一部，305-306，黃柏，檢索日期2016年5月17日 http://www.drugfuture.com/Pharmacopoeia/CP2015-1/305-306.pdf
中華人民共和國國家標準，GB 19877.1-2005，特種洗手液。
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。丁豎朽，檢索日期2016年5 月17日。http://bencao.lookup.tw/19788.html#.V1xdh1K7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。白花蜈蚣，檢索日期2016 年5月17日。http://bencao.lookup.tw/36894.html#.V1xiflK7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。防風，檢索日期2016年5月 17日。http://bencao.lookup.tw/9408.html#.V1xe6FK7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。苦楝，檢索日期2016年5月 17日。http://bencao.lookup.tw/19956.html#.V1xjN1K7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。香茅，檢索日期2016年5月 17日。http://bencao.lookup.tw/38214.html#.V1xi7VK7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。啤酒花，檢索日期2016年5 月17日。http://bencao.lookup.tw/26730.html#.V1xjl1K7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。蛇床子，檢索日期2016年5 月17日。http://bencao.lookup.tw/30888.html#.V1xgTlK7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。野莧菜，檢索日期2016年5月17日。http://bencao.lookup.tw/42132.html#.V1xaYVK7fm2
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。菟絲子，檢索日期2016年5 月17日。http://bencao.lookup.tw/35994.html#.V1xj7VK7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。黃柏，檢索日期2016年5 月17日。http://bencao.lookup.tw/15420.html#.V1xug1K7fm0
中華本草(1999)。中國中醫藥管理局主持編纂。黃鵪菜，檢索日期2016年5 月17日。http://bencao.lookup.tw/15414.html#.V1xf4FK7fm0
方清河(2015)。中國史新論醫療史分冊。台北：中央研究院。
王佳、王艷萍、史健波、周麗娜(2010)。13種中草藥對從頭皮屑中分離純化的限制性馬拉色菌體外抑菌作用。瀋陽藥科大學學報，21(11)，p915-918。
台北植物園植物資料庫，小葉樟，檢索日期2016年5月17日 http://tpbg.tfri.gov.tw/PlantContent.php?rid=1267
台北植物園植物資料庫，澳洲茶樹，檢索日期2016年5月17日 http://tpbg.tfri.gov.tw/PlantContent.php?rid=833
台灣野生植物資料庫，小葉羅漢松，檢索日期2016年5月17日 http://plant.tesri.gov.tw/plant100/WebPlantDetail.aspx?tno=206002052
台灣野生植物資料庫，澳洲茶樹，檢索日期2016年5月17日 http://plant.tesri.gov.tw/plant100/WebPlantDetail.aspx?tno=456007620
朱敏、王俠生、李莉、王家俊、章強強(2008)。三種中草藥單體治療豚鼠皮 膚馬拉色菌感染的實驗研究。臨床皮膚科雜誌，37(3)，160-162。
李健(2013)。中藥材保健圖典。新北市：人類智庫。
李崗榮(2012)。常見的台灣青草藥第一冊，月桃，242-245。新北市：西北 國際文化。
李崗榮(2012)。常見的台灣青草藥第一冊，牛樟，206-209，新北市：西北 國際文化。
李崗榮(2012)。常見的台灣青草藥第二冊，左手香，126-129。新北市：西 北國際文化。
李崗榮(2012)。常見的台灣青草藥第二冊，兔兒菜，272-275。新北市：西 北國際文化。
李崗榮(2012)。常見的台灣青草藥第二冊，狗尾草，222-225。新北市：西 北國際文化。
李崗榮(2012)。常見的台灣青草藥第三冊，紫背草，326-331。新北市：西 北國際文化。
紀戊霖(2010)。中藥材茶療事典。新店：源樺出版。
徐寒、于泓、游思恒(2005)。中國歷史百科全書。吉林：音像出版社，505-507。
陳文偉，王震宙(2003)。超臨界萃取技術的應用研究進展。西部糧油科技。 06期。
陳嵐、滿瑞林(2006)。超臨界萃取技術及其應用研究。現代食品科技。Vol 22 No.1(總87) 文章篇號：1007-2764(2006)01-0199-073。
陳溪潭(1997)。本省麻豆文旦產業之沿革與展望。台灣農業，33(4)：p39-52。
陳溪潭(2000)。台灣柚類品種果實特性介紹。台南區農業專訊。第33期：p8~12 檢索2016年5月17日http://book.tndais.gov.tw/Magazine/mag33-3.htm
陳榮五、陳信君、郭肇凱、張隆仁(2009)。非洲白蔘(Mondia whitei)揮發性香氣化合物之分析。臺灣園藝(J. Taiwan Soc. Hort. Sci.) 55(1)，p55-62。
黃霏莉(2014)。常見皮膚病治療與中醫調養。香港：商務印書館。
董鳳軍(2013)。植物組織培養。北京：機械工業出版社
農業知識入口網，行政院農委會，芳香萬壽菊。檢索日期2016年5月16日http://kmweb.coa.gov.tw/Illustrations/detail.aspx?id=729260&t=2015/1/ 6%20%E4%B8%8A%E5%8D%88%2002:36:55#
甄志亞(1997)。中國醫學史。上海：科學技術出版社。
臺灣生物多樣性資訊網-TaiBIF， 牛樟，檢索日期2016年5月16日 http://www.taibif.tw/zh/namecode/203595
蔡榮哲(2007)。柑橘類果皮加工利用。台灣柑橘產業發展研討會專刊，p249~259。
鄭曉暉、許愛娥、位曉東、夏修蛟(2005)。39種中草藥對馬拉色菌抑菌實驗 研究。中國中西醫結合皮膚性病學雜誌，4(3)，178-179。
魏子孝、聶莉芳(1994)。中醫中藥史。北市：文津出版社。
蘇裕昌，何振隆，精油的化學，林業研究專訊 Vol.15 No.3， 2008。