為了提高寄生性蠕蟲在低溫下長期冷凍保存的存活率,本研究嚐試分兩步驟加入各種 單一或混合式的冷凍保護劑,然後以急速冷凍的方法來保存柯氏中殖孔條蟲之第二期 幼蟲一四盤蚴。經由測試的結果發現,使用混合式的冷凍保護劑VS1(vitrificatio -n solution 1),可成功地將四盤蚴冷凍保存於-196℃至少三個月。蟲體先與 25%VS125℃下作用14至16分鐘,接著置於100%VS1或90%VS1中, 在4℃下分別作用10分鐘與15分鐘,隨後進行液態氮之急速冷凍,解凍後四盤蚴 之存活率為93.7%與84.8%。解凍後幼蟲之感染力與無性繁殖能力以小白鼠 感染實驗來測試,注射30至50隻經由100%VS1保存過之蟲體於小白鼠腹腔中 ,於感染12週後,可發現肝臟有中度的寄生病變,並且可自腹腔及肝臟組織內得正 常的四盤蚴。至於其他三種冷凍保護劑(乙二醇、DE1與DE2,DMSO-ethanediol so -lution 1and 2)之兩段式作用,配合急速冷凍的方法,並不適合用來保存四盤蚴 ,在數種不同的作用濃度與時間下,保存於液態氮中之蟲體均無存活。本實驗之結果 證實了同時使用多種冷凍保護劑可提高寄生性蠕蟲冷凍保存的可能性。
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