A 型血友病乃因第八因子基因異常所引起，一般利用聚合鏈反應（polymerase
chain reaction；PCR ）及直接核酸序列定位（direct Sequencing ）等方法，
可以直接分析病人的第八因子基因，然而第八因子基因相當巨大，本論文闡述利用
電腦程式設計45對PCR 所需的引子（oligonucleotide primers ）來放大第八因子
子基因的每個特定的exon．接著用單股結構多形性（single strand conformation
polymorphism ；SSCP）及雙去氧指印法（dideoxy fingerprinting ；）兩種簡單
篩檢方法，可偵測出突變的核糖核酸片段（mutated DNA ）．這兩種方法都是應用
單股核糖核酸的特定形狀（distinct conformation）而偵測出核酸（
nucleotide）的突變本研究初步利用SSCP及ddF 方法鑑定出不正常的DNA 片段，這
些DNA 片段相對應的exon區域再被用 PCR放大後，定出核酸序列的改變．在此階
實驗，共分析了87位病人，其中40位可由SSCP及 ddF找出突變型，這些人中， 5位
具輕微至中型症狀，其餘35位為嚴重型的 A型血友病，對於每個病人，本研究均皆
找出一個（且僅有一個）突變型，而這些突變型中有21個是單一核酸突變（
single nucleotide mutation），其中 8個變成nonsense，13個變成 missense
codons．另外19位中有16個是減少（delete）或增加了（insert）1-11個核酸，
其餘 3個卻失掉了一大段基因片段．利用SSCP本實驗也檢視8 個已被確定的第八因
子多形性（polymorphism）．其中 3個基因多形性的發生率在中國人與西方人不同
，這 3個分別是codon 1241，codon 1269及codon 2223，而其發生率分別為 1.2％
，15.7％及97.9％．在本論文進行同時，有實驗報導指出嚴重型病人中約有50％病
人其突變型可能是由於intron 22 有未明的突變導致其第八因子mRNA不正常．本研
究對於其餘47位病人之中的24位分析其intron 22 ．利用反轉錄－聚合鏈反應（
RT-PCR）的方法，證明17個嚴重的病人的白血球中具有不正常的第八因子mRNA．
綜論：本論文有三個重點
一．是利用PCR-SSCP，ddF 及直接核酸序列分析找出血友病病人確切的突變型．
二．是證明有38％的病人其第八因子基因突變是由於intron 22 的未明異常，產生
不正常的第八因子mRNA導致無法製造正常的第八因子蛋白．
三．是利用SSCP分析 8種第八因子多性在中國人的發生率．另外，本研究至少有二
個應用：
一．是PCR-SSCP， ddF及直接核酸序列分析的結果可應用於病人家屬的帶因者鑑
（carrier detection ）及產前診斷（prenatal diagnosis）．
二．是第八因子基因表現（gene expression ）及蛋白結構功能關係（
structure-function relationships）的研究．
$9310866
$9310866
|