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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:劉向正
研究生(外文):Liu , hsiang-cheng
論文名稱:香蕉萎縮病毒系統與蟲媒傳染特性
論文名稱(外文):Strains of Banana Bunchy-Top Virus and Transmission Natures of Vector Aphids
指導教授:蘇鴻基蘇鴻基引用關係
指導教授(外文):Hong - Ji Su
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:植物病理學研究所
學門:農業科學學門
學類:植物保護學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2000
畢業學年度:88
語文別:中文
論文頁數:105
中文關鍵詞:香蕉萎縮病毒永續性冷凍乾燥
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香蕉萎縮病毒 ( BBTV ),經蕉蚜傳染將BBTV系統分離為單株化,得系統多數分離株,各分離株在北蕉( AAA, cavendish )上依病徵表現差異大致可分為 : 強毒型系統( S )引起嚴重之典型病徵,包括植株萎縮、葉片細小萎黃、葉片叢生集中於株頂、葉脈透化、葉柄出現綠條紋。中間型系統( I )引起輕度矮化及葉片萎縮,葉脈透化清楚。輕微型系統( M )感染蕉株不呈現顯著病徵,惟有引起輕微之斷續狀葉脈透化。潛伏型系統( L )不引起任何病徵,外觀與健株相似。單元抗體( 2H6 )與此四系統均可反應,但不能區分系統間之差異。利用三對引子對套組 ( C1-CR、S-CR、SR-CR ) 進行聚合酵素鏈鎖反應 ( PCR ),將四種病毒系統病徵型之多數分離株鑑別分為六種基因型( PCR genotypes )。強毒型系統分離株可分為基因型I、II、III三種,台灣分離株分為I及II型而多半屬基因型II,惟有馬來西亞之分離株屬III型,而不與2H6單元抗體反應。而中間型、輕微型及潛伏型病毒系統分屬另外三個基因型( IV、 V、VI )。高敏感度之PCR偵測技術能偵測單隻蕉蚜蟲體內之BBTV病毒,並可利用於探討BBTV之蕉蚜蟲媒傳播特性( transmission vectorship )。確定蕉蚜傳染BBTV所需之獲毒最短時間( Acquisition feeding period ) 為二小時。並以PCR追蹤蟲體內BBTV濃度動態,推定病毒可在體內增殖屬永續性( propagative persistence )。而帶毒蕉蚜所無性繁殖之第二代一齡若蟲體內測不到病毒,表示此病毒不能經由蕉蚜無性繁殖至後代若蟲。在罹病株上成長之有翅型蕉蚜體中亦測到含有病毒存在,此和田間BBTV長距離傳播有密切的相關性。三對引子對之PCR 測定亦能鑑別單隻蚜蟲體中之病毒系統基因型。香蕉萎縮病毒,在病株韌皮部組織手切片,引起之特異性螢光物質,在六型病毒系統之病株韌皮組織中均有見到,但系統強弱有顯著差異。香蕉萎縮病毒在病組織中可利用冷凍乾燥 ( Freeze drying )、40℃及50℃乾燥罹病組織,保存在4℃,發現該病毒保存時間至少可長達一年,,以ELISA 及PCR測定,可測到病毒,得知以乾燥與貯存方法仍可維持病毒之鞘蛋白及核酸之反應活性。屬黃萎型之BBTV,殺蟲劑之施用應能防止蕉蚜之媒介傳染,藥劑試驗顯示系統性之益達胺粒劑,施用於土壤有效預防北蕉TC苗之帶毒蕉蚜傳染,而藥效持續長達一個月左右。
Single pure isolates of banana bunchy top virus (BBTV) strains were obtained through transmission by vector aphid( Pentalonia nigronervosa ). The BBTV was differentiated into such four strains as severe (S), intermediate (I), mild (M) and latent (L) strains according to symptom expression on Cavendish banana in Taiwan.S strain induced severe typical symptoms including stunted, chlorotic margin and narrow, erect new leaves, bunchy top, vein clearing and dark green dot-dash streaks on petioles. I strain caused mild stunt, slight leaf atrophy and distinct vein clearing. M strain-infected banana plants produced no distinct symptoms except dash-like vein clearing scarcely. No visible symptoms was developed in L-strain-infected plants which were looked like healthy plants. The four strains were differentiated into six genotypes by polymerase chain reaction ( PCR ) amplification with 3 primer pairs (C1-CR, S-CR, SR-CR) followed by electrophoresis analysis. The monoclonal antibodies ( McAbs ) developed against BBTV were recognizing the common epitopes of Taiwan strains, therefore the selected McAb ( 2H6 ) reacted with the all strains of BBTV in Taiwan. However, the 2H6 McAb did not react with a severe isolate of BBTV from Sarawak, Malaysia.The virus is transmitted by the banana aphid in the persistent manner. Although the adult aphids reared on infected banana plants were BBTV positive in PCR tests, none of the offspring of the viruliferous adults were BBTV positive. This fact indicated that BBTV was not transmitted through axeual reproduction. BBTV was transmitted by non-alate adult banana ahpids transmission rate more than alate aphids. The minimum acquisition feeding period of banana aphid is 2 hours. BBTV may multiply in a aphids vectors in way of propagative persistence. The PCR genotypes of BBTV strain in banana identified by PCR tests with the three primer pairs. In direct fluorescence detection in thloem with on UV microscope, the 4 strains showed different degrees of specific fluorescence ( SF ), S strain produced largest amount of SF, L strain produced least SF. At 40℃or 50℃BBTV in tissue dried preserved at 4℃maintained serological activity for at least one year. Appication of systemic insecticides showed insecticidal efficacy for prenention BBTV transmission by banana aphid. No symptom appeared on banana plantlets treated with soil application of comfidor 2GR( 7.5g/plant ) before inoculation by viruliferous aphids.
目 錄
壹、 緒論-----------------------------------------1
貳、 前人研究-------------------------------------4
一、 香蕉萎縮病發生的歷史背景及區域概況--------4
二、 香蕉萎縮病的特性--------------------------5
三、 香蕉萎縮病的病徵--------------------------7
四、 香蕉萎縮病的寄主範圍----------------------7
五、 香蕉萎縮病的傳播途徑與媒介昆蟲傳染--------8
(一) 香蕉萎縮病的傳播途徑---------------------8
(二) 香蕉萎縮病的媒介昆蟲---------------------9
參、 材料與方法-----------------------------------11
一、 香蕉萎縮病毒系統之生物學鑑別( Biological characterization )---------------------------11
(一) 罹病材料的來源--------------------------11
(二) 病毒系統分離株的分離與在北蕉苗上之病徵表現-----------------------------------------11
(三) 健康蕉苗的來源--------------------------12
(四) 健康及帶毒蕉蚜的來源--------------------12
(五) 蕉蚜蟲媒之傳播率-----------------------13
(六) 香蕉萎縮病不同系統在病理細胞學上特異螢光之差異-----------------------------------13
二、 病毒系統之分子學鑑別( Molecular characterization )---------------------------14
(一) 以直接酵素連結抗體免疫分析法( ELISA )測定不同病毒系統之差異------------------------14
(二) 以聚合酵素連鎖反應( PCR )鑑別不同病毒系統----------------------------------------17
1. 由病組織萃取病毒核酸之製備-------------17
2. 引子對的來源---------------------------19
3. PCR反應物之製備-----------------------19
4. PCR反應條件---------------------------20
5. PCR產物之電泳膠體分析-----------------21
(三) 蕉蚜蟲體內香蕉萎縮病毒系統之PCR偵測----23
1. 蕉蚜蟲體內香蕉萎縮病病毒核酸之製備-----23
2. 引子對的來源---------------------------23
3. PCR反應物之製備-----------------------23
4. PCR反應條件---------------------------23
5. PCR產物之電泳膠體分析----------------23
三、 不同貯存法對病毒系統之存活性影響---------25
(一) 利用PCR及ELISA法對不同病毒系統以不同的乾燥貯存法保存一天之檢測------------------25
(二) 利用ELISA法對強毒型病毒系統( II,S-2 )以不同的乾燥貯存法保存二個月後之活性檢測------27
(三) 利用PCR及ELISA法對不同病毒系統以不同的乾燥貯存法保存一年後之活性檢測------------27
四、 香蕉萎縮病毒系統在田間感染分佈-----------28
(一) 南部田間之病毒系統調查------------------28
(二) 國外病毒系統之PCR型鑑別----------------28
五、 蕉蚜蟲體內之病毒永續性( persistence )--------28
(一) 不同蕉蚜數量蟲體內之病毒濃度動態--------29
(二) 蕉蚜各齡期蟲體內之病毒濃度動態----------29
(三) 蕉蚜一齡若蟲體內之帶毒情況--------------29
(四) 有翅型與無翅型蕉蚜之帶毒率--------------30
(五) 蕉蚜之獲毒飼養時間( acquisition feeding period )----------------------------------30
六、 殺蟲劑對蚜蟲傳播性之藥效-----------------31
(一) 不同劑型之殺蟲劑對蕉蚜致死之藥效持續性--31
(二) 不同殺蟲劑對預防蕉蚜傳播BBTV之藥效----32
肆、 結果-----------------------------------------34
一、 香蕉萎縮病毒系統之生物學鑑別( Biological characterization ) ----------------------------34
(一) 鑑別不同病毒系統分離株在北蕉上之病徵表現----------------------------------------34
(二) 蕉蚜蟲媒之傳播率------------------------35
(三) 病毒不同系統在病理細胞學上特異螢光之差異----------------------------------------36
二、 病毒系統之分子學鑑別( Molecular characterization ) ------------------------------------------37
(一) 以單元抗體之酵素連結抗體免疫分析法(ELISA)鑑定病毒系統 ---------------------------37
(二) 以聚合酵素連鎖反應( PCR )鑑別不同病毒系統----------------------------------------38
(三) 蕉蚜蟲體內香蕉萎縮病毒之PCR偵測與系統鑑別----------------------------------------39
三、 不同貯存法對病毒系統之存活性影響---------40
(一) 利用PCR及ELISA法對不同病毒系統以不同的乾燥貯存法保存一天之檢測------------------40
(二) 利用ELISA法對強毒型病毒系統( II, S-3 )以不同的乾燥貯存法保存二個月後之活性檢測------41
(三) 利用PCR及ELISA法對不同病毒系統以不同的乾燥貯存法保存一年後之活性檢測------------42
四、 香蕉萎縮病毒系統在田間感染分佈-----------43
(一) 南部田間之病毒系統調查------------------43
(二) 國外病毒系統之PCR型鑑別----------------43
五、 蕉蚜蟲體內之病毒永續性( persistence ) -------44
(一) 不同蕉蚜數量蟲體內之病毒濃度動態--------44
(二) 蕉蚜各齡期蟲體內之病毒濃度動態----------45
(三) 蕉蚜一齡若蟲體內之帶毒情況--------------45
(四) 有翅型與無翅型蕉蚜之帶毒率--------------46
(五) 蕉蚜之獲毒飼養時間( acquisition feeding period ) ----------------------------------------46
六、 殺蟲劑對蚜蟲傳播性之藥效-----------------47
(一) 不同劑型之殺蟲劑之對蕉蚜致死之藥效持續性-----------------------------------------48
(二) 不同殺蟲劑對預防蕉蚜傳播BBTV之藥效----48
伍、結論-------------------------------------------49
陸、中文摘要---------------------------------------55
染、英文摘要---------------------------------------57
捌、圖表說明---------------------------------------59
玖、參考文獻---------------------------------------99
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