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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:林怡諄
研究生(外文):Lin, Yi-Zhun
論文名稱:開發 LC/MS/MS 檢測紫背草中 吡咯啶類生物鹼之方法
論文名稱(外文):Detection of Pyrrolizidine Alkaloids in Emilia sonchifolia (L.) DC. by LC/MS/MS
指導教授:楊雅甄謝承紘
指導教授(外文):Yang, Ya-ChenHsieh, Cheng-Hung
口試委員:楊雅甄謝承紘謝宥諒丁美芳
口試委員(外文):Yang, Ya-ChenHsieh, Cheng-HungHsieh, You-LiangDing, Mei-fang
口試日期:2014-01-23
學位類別:碩士
校院名稱:亞洲大學
系所名稱:保健營養生技學系
學門:農業科學學門
學類:食品科學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2014
畢業學年度:102
語文別:中文
論文頁數:92
中文關鍵詞:紫背草雙稠吡咯啶類生物鹼高效液相層析儀液相層析串聯式質譜儀氣相層析質譜儀
外文關鍵詞:Emilia sonchifolia (L.) DC.pyrrolizidine alkaloidHPLCLC/MS/MSGC/MS
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紫背草 (Emilia sonchifolia (L.) DC. ) ,為菊科植物,別名一點紅、葉下紅、紅背草、羊蹄草。其功效具有清火、消炎解毒、解熱退燒等功效。為雙稠吡咯啶類生物鹼 (Pyrrolizidine alkaloids, PAs) 會導致肝毒性及致癌等生理活性。本研究以高效液相層析儀 (HPLC) 和液相層析串聯式質譜儀 (LC/MS/MS) 檢測出紫背草中共十三種PAs,包含有兩種類型之 PAs分別為:一、otonecine 類型,即 otosenine、petasitenine、desacetyldoronine、neosenkirkine、senkirkine、crotafoline、acetylotosenine、acetylpetasitenine、doronine、acetylsenkirkine ; 與二、 retronecine 類型,即 seneciphylline、senecionine。實驗以新鮮紫背草及市售乾燥紫背草作為檢驗樣品,經酸水萃取,進一步以陽離子交換固相萃取層析 (CE-SPE) 純化後,再利用 HPLC 及 LC/MS/MS 分析。定量分析以 senkirkine 、 senecionine 及 seneciphylline 標準品製作檢量線,利用 HPLC-UV 進行各 PAs 之含量測定 PAs 總含量為 1.269-31.133 (μg/g Herb)。結果也顯示,senkirkine 在紫背草中為含量最高之 PA,約為 0.22-23.86 (μg/g Herb)。本研究結果可提供消費者做為中草藥中是否含有 PAs 的風險評估依據,以保障國人使用中草藥之安全。
Emilia sonchifolia (L.) DC. (Lilac tasselflower, yi dain hong, Asteraceae). It’s effectiveness has anti-inflammatory, detoxifying, antipyretic , anti-fever and other effects. In this study, we have investigated the hepatotoxic and tumorigenic pyrrolizidine alkaloids (PAs) contained in Emilia sonchifolia (L.) DC. collected from several towns in Taiwan. Two structural types of PAs were identified from the ground whole plant by liquid chromatography (HPLC) method:otonecine bases,e.g. otosenine, petasitenine, desacetyldoronine, neosenkirkine, senkirkine, crotafoline, acetylotosenine, acetylpetasitenin, doronine and acetylsenkirkine; retronecine bases,e.g. seneciphylline and senecionine. Quantitation of the individual PA was determined by linear regression curves. The senkirkine、senecionine and seneciphylline were examined standard calibration curves. The concentration of PAs was estimated to be 1.269-31.133 (μg/g Herb) by HPLC-UV. Senkirkine figured as a major PA (0.22-23.86 μg/g Herb) in E. sonchifolia. The results of this study will provide important information to public consumers regarding the health risk of intake E. sonchifolia. containing PAs.
目錄……………………………I
圖目錄…………………………… III
表目錄…………………………… VI
中文摘要……………………………VII
Abstract……………………………VIII
第一章 緒論……………………………1
第一節 研究動機…………………………… 1
第二節 研究目的…………………………… 2
第二章 文獻回顧……………………………3
第一節 紫背草之介紹……………………………3
第二節 紫背草的化學成分及藥性、藥理應用……………………………5
第三節 雙稠吡咯啶類生物鹼介紹……………………………7
一、雙稠吡咯啶類生物鹼的基本結構……………………………7
二、雙稠吡咯啶類生物鹼代謝路徑……………………………11
三、雙稠吡咯啶類生物鹼於生物體的基因毒性……………………………14
(1) DHP-DNA adduct 的形成……………………………14
(2) PA的基因毒性……………………………19
第四節 實驗與檢驗方式……………………………23
一、PAs 的純化方法……………………………23
二、PAs 的定性與定量實驗-高效液相層析儀 (HPLC)……………………………25
三、PAs 的定性實驗-液相層析串聯質譜儀 (LC/MS/MS)……………………………27
(一) 串聯質譜儀 (Tandem Mass Spectrometer, MS/MS)……………………………27
(二) 電灑法 (electrospray ionization,ESI)……………………………28
四、PAs 的定性實驗-氣相層析質譜儀 (GC/MS)……………………………30
第三章 材料與方法……………………………31
第一節 材料……………………………31
一、紫背草樣品……………………………31
二、實驗藥品……………………………33
三、實驗儀器……………………………33
第二節 實驗方法……………………………35
一、實驗流程……………………………35
二、紫背草樣品萃取……………………………37
三、固相萃取 (Cation exchange solid-phase extraction;CE-SPE)……………………………37
四、以高效能液相層析儀 (HPLC)分析紫背草……………………………39
(1) HPLC 分析條件……………………………39
(2) LC/MS/MS 分析條件……………………………40
五、以氣相層析質譜儀 (GC/MS)分析紫背草……………………………41
第四章 結果與討論……………………………42
第一節 以 LC/MS/MS 定性新鮮紫背草中毒性吡咯啶生物鹼……………………………42
第二節 以 HPLC對紫背草進行定量分析……………………………57
一、PAs 檢量線……………………………57
二、PAs 偵測極限 (limit of detection, LOD)……………………………61
三、吡咯啶生物鹼定量分析……………………………62
第三節、紫背草以GC/MS進行定性及定量分析……………………………73
一、GC/MS 定性分析……………………………73
二、GC/MS 定量分析……………………………81
第六章 結論……………………………86
參考文獻……………………………87

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