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研究生:周延芳
研究生(外文):Yen-Fang Chou
論文名稱:接種雙叉桿菌對克弗爾品質與抗氧化之影響
論文名稱(外文):Effect of bifidobacteria inoculation on the quality and antioxidative property of kefir
指導教授:游若
指導教授(外文):Roch-Chui Yu
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:食品科技研究所
學門:農業科學學門
學類:食品科學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2000
畢業學年度:88
語文別:中文
論文頁數:102
中文關鍵詞:雙叉桿菌克弗爾多醣抗氧化發酵膽鹽乳酸菌酵母菌
外文關鍵詞:bifidobacteriakefirpolysaccharidesantioxidativefermentationbile saltlactic acid bacteriayeast
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本研究探討以雙叉桿菌與克弗爾粒為菌所生產之克弗爾,在克弗爾發酵期間雙叉桿菌、乳酸球菌、白色念珠菌及酵母菌的生長,克弗爾內乳酸菌在體外試驗中對鹽酸、膽鹽之忍受性,及雙叉桿菌對克弗爾品質與抗氧化能力之影響。
結果顯示雙叉桿菌可與克弗爾粒21℃在下共同發酵,其菌數達107~108 CFU/ml,其中以B. longum及B. adolescentis菌數為最高。B. longum不會影響克弗爾內原有的菌相及酒精產量。此外,接種雙叉桿菌之處理組較控制組可縮短發酵時間,其最終可滴定酸度為1.6-1.7%,可揮發性酸度為0.038-0.047%。雙叉桿菌於30及37℃生長雖較佳,但因其快速生長導致克弗爾產生不良風味且在pH4.7即產生乳清分層現象。
克弗爾中的乳酸球菌及白色念珠菌在體外試驗,可存活於鹽酸及膽鹽溶液,在pH2及0.6%膽鹽下分別經過4及8小時後,菌數下降了2個對數值左右,而在相同處理條件下,雙叉桿菌菌數則下降1~2個對數值。
克弗爾粒本身能產生多醣體,其在21℃的多醣產量較30及37℃培養者高。隨著發酵時間延長,細胞生長、可滴定酸度增加、還原糖量減少及多醣體含量增加,且多醣生產量大多在發酵後期大量產生。因為雙叉桿菌在21℃生長不良且產生黏膜,所以接種B. longum及B. adolescentis之處理組,在21℃測出之多醣產量為最高。大致上,接種雙叉桿菌之處理組,其在pH6與7有較高的多醣產量,pH5與8之多醣產量則較低。
在探討克弗爾之抗氧化活性方面,發現克弗爾菌體胞內萃出物本身即具有抑制抗壞血酸自氧化作用、螯合亞鐵、銅離子及清除羥自由基能力。而接種雙叉桿菌控制組之菌體胞內萃出物方面,發現雙叉桿菌無法抑制抗壞血酸自氧化作用,但可增加克弗爾螯合亞鐵、銅離子及清除羥自由基能力。
接種雙叉桿菌之牛乳發酵液普遍較MRS發酵液之抗氧化力高,兩者皆在抑制抗壞血酸自氧化作用、螯合銅離子及清除羥自由基能力方面顯示具有抗氧化能力。在螯合亞鐵離子方面,以MRS培養液培養之發酵液,沒有螯合亞鐵離子之能力,但牛奶之發酵液則有螯合亞鐵離子能力。
Abstract
This study investigated the growth of bifidobacteria, lactococci, leuconostocs and yeast during kefir fermentation, using bifidobacteria and kefir grain as starters. The tolerance of lactic acid bacteria from kefir to HCL and bile salt solution, the influence of bifidobacteria to the quality and the antioxidative of kefir were also investigated.
Results indicated that bifidobacteria could co-cultivate with kefir grain at 21℃ and there’s cells counts were from 107~108 CFU/ml and the higher counts are B. longum and B. adolescentis. B. longum would not affect the original microbial flora and ethanol content of kefir. Furthermore, the fermentation time of bifidobacteria treatments were shorter than the control, which titratable acidity of final fermentation broth were from 1.64 to 1.71%, volatile acidity were from 0.038 to 0.047%. Bifidobacteria grew rapidly at 30 and 37℃; however, the higher growth rate caused off-flavor and whey separation of kefir when it’s pH arrived at 4.7.
Lactococci and leuconostocs from kefir could survive in HCl and bile salt solutions. In pH2 and 0.6% bile salt solutions for 4 to 8 hours, their cells counts were reduced about two log values, and bifidobacteria were reduced about one or two log values.
Kefir grain could produce polysaccharide with a higher yield at 21℃ than at 30 or 37℃. As fermentation time was extended, the cell-counts of microflora, the titratable acidity and polysaccharide yields were also increased while the reducing sugar were decreased. The production of polysaccharide usually raised at the end of kefir fermentation. Because bifidobacteria grew badly at 21℃ and produced slime, B. longum and B. adolesentic treatments showed the highest polysaccharide yield at 21℃. Bifidobacteria treatments produced higher polysaccharide at pH 6 and 7 than at pH5 and 8.
Antioxidative property of kefir indicated that intracellular extracts of kefir flora could inhibit ascorbate autooxidation, metal ion chelation for Fe+2 and Cu+2, and scavenge of free hydroxyl radical. Bifidobacteria inoculation could increase chelation ability for Fe+2 and Cu+2, hydroxyl radical scavenging ability, but couldn’t increase the inhibition to ascorbate autooxidation.
Milk fermentation broth inoculation with bifidobacteria showed higher antioxidative property than MRS broth. Inhibition rates of ascorbate autooxidation, Cu+2 chelation and hydroxyl radical scavenge were also found in milk and MRS fermentation broths. The supernatant obtained from MRS broth didn’t show Fe+2 chelating ability.
中文摘要……………………………………………………………i
英文摘要………………………………………………………...iii
壹、 前言………………………………………………………….1
貳、 文獻整理…………………………………………………….2
一、 克弗爾(kefir) .…………………………………………..…2
(一)簡介….……………………………………………….2
(二)菌...…..…………………………………………….3
(三)克弗蘭(kefiran).………………………………….….6
(四)克弗爾之營養價值.……………………………….….7
(五)發酵所引起乳成分的變化.………………………….8
二、 乳酸菌..………………………………………………...…10
(一)定義..……………………………………………..…10
(二)分類…..…………………………………………..…11
(三)原生保健性菌種(probiotics)…………………….…13
(四)發酵特性...……...……………………………….….14
(五)乳酸菌之作用.………………………………….….17
三、 酵母菌……..………………………………………...……18
(一)定義..……………………………………………..…18
(二)酵母菌之營養價值..……………………………..…19
(三)酵母菌自體水解物……...……………………….…19
四、 胞外多醣體…………………………………………….....20
(一)多醣體之抗腫瘤活性..…………………………..…20
(二)黏質性發酵乳所含多醣之抗腫瘤活性…………..…22
(三)不同培養條件對多醣產量的影響.……………….…23
(四)胞外多醣體之成分…………….....……………….…24
五、 氧化傷害……………………………………………….....25
(一)氧化反應…………………….…………………….....25
1.氧分子化學……………………………………..…25
2.自由基反應…………………………..…………..…27
3.氧化傷害………………………...……………….…29
(二)抗氧化反應………………………………………......30
1.酵素性的抑制………..…………………………..…30
2.金屬離子螯合………………………..…………..…31
3.抗氧化劑………………………...……………….…31
(三)微生物抗氧化劑的開發………………………….....32
參、 材料與方法………………………………………………...34
一、 實驗材料…..……………………………………….....34
(一)菌種…………………..…………………………..…34
(二)原料…………………..…………………………..…34
(三)培養基………………..…………………………..…34
(四)藥品…………………..…………………………..…34
二、 實驗材料….….…………………………………….....35
(一)菌株培養……………..…………………………..…35
(二)菌數測定……………..…………………………..…35
(三)pH值及可滴定酸..…..…………………………..…36
(四)可揮發性酸…………..…………………………..…37
(五)酒精度測定…………..…………………………..…37
(六)耐酸、耐膽鹽之試驗..……………………………..…38
(七)多醣體含量…………..…………………………..…38
(八)細菌乾重……………..…………………………..…39
(九)還原糖含量…………..…………………………..…39
(十)抗氧化活性..………..……………………………..…39
(十一)統計分析…..………..…………………………..…41
肆、 結果與討論………………………………………………...42
一、 測定接種雙叉桿菌於克弗爾發酵期間之微生物菌數………………………….…………………………….42
(一)溫度對雙叉桿菌於克弗爾發酵期間生長之影響………………………………………….…………..…42
(二)溫度對克弗爾菌叢的影響…………………..…..…44
二、 克弗爾品質之測定……………………………………….44
(一)pH值及可滴定酸度………………….…………..…44
(二)可揮發性酸度……………………….…………..…49
(三)酒精含量……………….…………….…………..…51
三、 雙叉桿菌及克弗爾菌對鹽酸及膽鹽之耐受性……….51
(一)鹽酸溶液之耐受性.………………….…………..…51
(二)膽鹽溶液之耐受性.………………….…………..…55
四、 克弗爾之多醣產量………………………..…..………….57
(一)溫度對多醣產量的影響….………….…………..…57
(二)pH值對多醣產量的影響………………………...…62
五、 抗氧化活性……………………………………………….65
(一)抑制抗壞血酸自氧化能力.………….…………..…65
(二)金屬離子螯合能力…….…………….…………..…67
(三)對羥自由基之清除能力….………….…………..…70
(四)還原力………………….…………….…………..…72
伍、 結論..……………………………………………………….77
陸、 參考文獻…..……………………………………………….79
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