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T42G病毒為本實驗室在1987年鹿谷養鱒場發生大量鱒魚死亡時，由其病魚體所分離
到的一種具兩段雙股核醣核酸病毒，在分類上屬於Birnaviridae，為感染性胰臟壞
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死病毒（infectious pancreatic necrosis virus, 簡稱IPNV）之VR-299電泳型。
其基因體大小為Ａ段3.8kb 及Ｂ段3.2kb ，分別轉譯四個病毒蛋白（Ａ段）及核醣
核酸轉錄酵素(RNA transcriptase) （Ｂ段）。本實驗 T42G 病毒的 cDNA 是利用
hexanucleotide當作random primer 或用專一性引導子(specific primers)及反轉
錄酵素(reverse transcriptase) 來合成的，雙股核醣核酸的第一階段變性條件，
以處理一次所合成之cDNA的產率優於處理兩次者，且當引導子與核醣核酸模板之用
量比例由0.5:1 提高至1:1 時，所合成之cDNA的分子變大。針對殼蛋白所設計的四
個專一性引導子，各別使用來合成T42G cDNA ，由結果顯示，Ａ、Ｂ兩個專一性引
導子與T42G核醣核酸模板anneal情形較差，Ｃ、Ｄ兩組合成cDNA之分子較大，可達
2.0kb ，且Ｄ之專一性引導子合成cDNA量最多。此合成之cDNA連接於pGEM7zf(-)之
EcoRI 位置，再轉形(transform) 至大腸桿菌JM109 中。利用EcoRI切割及DNA dot
hybridization 分析不具β－半乳糖分解酵素(β-galactosidase)活性的選殖株，
顯示共有13株來自於Ａ段基因體及１株來自於Ｂ段基因體，其大小在Ａ株群為0.2
至0.8kb，在Ｂ株則為0.3kb。其彼此間之重疊關係經過交叉交(cross hybridizat-
ion)實驗後得知，八個較大的Ａ選殖株clone7, 53, 1, 33, 90, 94, 97, 100插入
DNA 的兩端已被定序出來，並已找出其在基因體上的位置，但由於插入DNA 可能存
在有難以變性的二級結構，所以目前仍無法將插入DNA 的全長序列均讀出，現正以
傳代無性繁殖系(subclones) 的方法改善此一缺失。
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