跳到主要內容

臺灣博碩士論文加值系統

(216.73.216.54) 您好!臺灣時間:2026/01/12 05:20
字體大小: 字級放大   字級縮小   預設字形  
回查詢結果 :::

詳目顯示

我願授權國圖
: 
twitterline
研究生:林順富
研究生(外文):LIN,SUN-FU
論文名稱:ACREMONIUM-STRICTUM生產之葡萄寡醣氧化酵素之研究
論文名稱(外文):Studies of the glucooligosaccharide oxidase from Acremonium strictum
指導教授:蔡英傑蔡英傑引用關係
指導教授(外文):CAI,YING-JIE
學位類別:博士
校院名稱:國立陽明大學
系所名稱:生化科學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1991
畢業學年度:79
語文別:中文
論文頁數:154
中文關鍵詞:葡萄寡醣氧化酵素黴菌菌株皮培養基菌體外液飽和硫酸銨醣蛋白
外文關鍵詞:ACREMONIUM-STRICTUMULTROGEL-HYDROXYAPAPTITEEDTA
相關次數:
  • 被引用被引用:3
  • 點閱點閱:265
  • 評分評分:
  • 下載下載:0
  • 收藏至我的研究室書目清單書目收藏:0
我們從土壤中篩選出一株可生產葡萄寡醣氧化繪的霉菌菌株,編號為T1,經過詳細的
菌學鑒定及相關菌種之活性比對,確認其菌名為Acremonium strictum 。T1菌在 皮
培養基中培養5-7 天后,在菌體外液中可測出葡萄寡醣氧化繪的活性。
粗酵素液經由45.-48% 飽和硫酸銨分割沈澱,Fractogel DEAE-650M, Fractogel Ph-
enyl-650M,Biogel P100 及Ultrogel hydroxyapaptite等管柱純化后,可獲得均質化
的酵素。比活性由原來的0.004 unit/mg , 提高到2.2 unit/mg ,純度提高550 倍,
回收率21%。
純化之酵素是一種醣蛋白, SDS-PAGE及HPLC分子篩管柱,認為是單一勝踽所構成,分
子量大約是61KDa 左右。含醣量8∼31%。PI在4.2∼4.4之間。純化的酵素帶有黃色,
在274,379 及444mm 等波長處有明顯之吸收峰,而所含flavo特質為FAD , 且1 莫耳的
酵素含有等莫耳FAD 。其a nm lcm吸光值為19.2mM .cm 。
酵素最適反應溫度50℃, 最適反應pH為8-10, 在50℃下維持60分, 仍具有80% 之活性
, 而在pH5 至pH11之間, 酵素相當穩定。本酵素也受1mM Hg 及Fe 離子的完全抑制
, 1mM TNM 化學抑制對酵素有80% 的抑制性。但EDTA,o-phenanthroline及PCMB對酵
素活性影響不大。
本酵素只對葡萄糖、葡萄寡醣、纖維寡醣及乳糖等少數醣類作用,顯示高的基質專一
性,基於對基質的反應性,將此酵素命名為葡萄寡醣氧化繪。酵素對乳糖及纖維二糖
有基質抑制性導致在高、低基質濃度時有不同之反應力,在10mM濃度作用時,麥芽糖
麥芽三糖, 乳糖及纖維二糖及葡萄糖的本對活性為100:94:64:47 59 。但在0.5mM 濃
度作用時,其相對活性分別為15:11:100:120:4 。酵素對纖維二糖、乳糖、麥芽糖及
葡萄糖的Km值分別為0.12、0.38、2.78及23mM。而纖維二糖和乳糖對酵素引起最低基
質制濃度分別為0.1mM 及0.25mM左右。
酵素作用的產物經FT-IR, FAB Mass, H-NMR和 C-NMR 等光譜證實為醛糖酸。經詳細
的計量反應物和產物的變化關系,確定了醣類和O 的消耗及醛醣酸及H O 的生成關系
都是等莫耳變化的。
T 菌經由NTG 誘導結果,篩選出一株命名為T1-38 之變祑株,可穩定的生產大量酵素
,粗酵素液活性和T1相比, 提高約40倍。T1-38 變祑株的活性也可由液體培養中獲得
,使用4%蔗糖, 4%脫脂黃豆粉、0.5%NaCl, 0.2%K HPO 及0.02%MgSO ‧7H O(PH6.5)
的培養基,30℃振蕩培養到第5 天時, 有最好的酵素產量。
葡萄寡醣氧經繪在未來的使用上,可開發成澱粉繪及纖維素繪的新型酵素活性測定法
、寡糖類的定量法及生產寡糖酸等方面的應用。
℃℃℃℃℃℃
℃℃℃℃℃℃
目錄
第一章 緒言
第一節 醣類氧化脫氫
第二節 醣類氧化 之應用
第三節 論文之研究目的
第二章 材料與方法
第一節 菌種篩選
第二節 酵素活性測定法
第三節 變異株之誘導、分離和篩選
第四節 菌學研究
第五節 培養基之探討
第六節 酵素的生產及純化
第七節 蛋白質含量之測定
第八節 酵素之性質研究
第九節 抗血清之製備
第十節 西方墨點測試
第十一節 材料
第十二節 儀器
第三章 結果與討論
第一節 寡醣氧化 生產茵之篩選
第二節 T1菌株之菌學研究
第三節 寡醣氧化 之生產與純化
第四節 酵素之純度鑑定
第五節 酵素之理化性質
第六節 Acremonium strictumT1英號株之突變改良及突變株之酵素生產
第七節 T1-38酵素生產及純化
第四章 結論及未來應用
第一節 菌種篩選、鑑定、變異株分離及培養基的探討
第二節 酵素之生產及純化
第三節 酵素之性質研究
第四節 葡萄寡糖氧化之應用
參考文獻
誌謝
中文摘要
英文摘要
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
第一頁 上一頁 下一頁 最後一頁 top