臺灣博碩士論文加值系統

本研究目的在探討2006 年8 月至2008 年6 月鰻魚分離Edwardsiella
tarda (E. tarda) 之鑑定及對抗菌劑之藥物感受性。針對養殖場病例進行
E. tarda 之分離鑑定；所分離菌株經SS agar 初步鑑定，再利用
YM-NTUH 鑑定程序進行葡萄糖醱酵性革蘭氏陰性菌之實驗鑑定及API
20 E 套組鑑定，最後利用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)
檢測鰻魚E. tarda 分離株，結果顯示96 株分離株均能利用特異性引子
對PCR 快速鑑定E. tarda 的基因體DNA。並以16S rRNA 基因分析
96 株E. tarda 之鰻魚分離株並與標準菌株EIB 202 (ATCC 15947) 之基
因體DNA 比對，除兩株分離株的相似度達99.4% 外，兩株基因序列第
393 位置T 變C 有差異性外，其餘菌株相似度皆為100%。利用瓊脂
平板稀釋法測定E. tarda 分離株對9 種常用抗菌劑之藥物感受性，結果
對ofloxacin 及norfloxacin 的感受性最高；對oxolinic acid 及
flumequine 的感受性次之；對oxytetracycline 及doxycycline 的感受性
再次之；而對sulfadimethoxine、sulfamonomethoxine 及florfenicol 的感
受性最差。因此，建議業者在獸醫師指示下，以鰻魚允許使用之抗菌劑
flumequine、oxolinic acid 作為臨床治療用藥。

The identification and antimicrobial susceptibility testing of Edwardiella
tarda were performed in this study. E. tarda were isolated from infected farms.
Bacteria isolates were primarily screened on SS agar. Bacteria identification
was then confirmed by the YM-NTUH computer coding system (which
identifies glucose-fermenting Gram-negative bacilli) and commercially
available API 20E kits. E. tarda genomic DNA can be detected by PCR in all
of the 96 strains isolates. Analysis of their 16S rRNA sequences showed
100% similarity with E. tarda EIB 202 (ATCC15947) reference strains,
except for two strains of the isolates, which had a 99.4% similarity. According
to agar dilution method of antimicrobial susceptibility testing, the E. tarda
isolates were most susceptible to ofloxacin and norfloxacin, followed by
oxolinic acid, flumequine, oxytetracycline and doxycycline, and they were
most resistant to sulfadimethoxine sulfamonomethoxine and florfenicol. The
farmers were advised to treat sick eels with flumequine and oxolinic acid
under the veterinarian’s instruction.

目次
中文摘要................................................................................................ i
英文摘要................................................................................................ ii
目次........................................................................................................ iii
表次........................................................................................................ vi
圖次........................................................................................................ vii
第1 章前言… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … . 1
第2 章文獻探討… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … . 5
2.1 病原特性… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 5
2.2 自然及實驗性宿主… … … … … … … … … … … … … … … … … .. 5
2.3 感染年齡季節… … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 6
2.4 誘發感染因素… … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 6
2.5 肉眼病變… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 7
2.6 病理學… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 7
2.7 致病機制… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 8
2.8 溶血毒素… … … … … … … … … … … … … … … … … .… … … … . 8
2.9 血清型… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 9
2.10 抗菌劑感受性試驗… … … … … … … … … … … … … … … … … 9
2.11 鰻魚免疫系統… … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 10
2.12 免疫試驗… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 10
iv
2.13 益生菌應用… … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 12
2.14 飼養管理… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 13
2.15 防治策略… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 13
第3 章材料與方法… … … … … … … … … … … … … … … … … … ... 15
3.1 病例收集… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 15
3.2 標準株來源… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 15
3.3 外觀及肉眼解剖病變檢查… … … … … … … … … … … … … … 15
3.4 微生物分離培養… … … … … … … … … … … … … … … … … … 15
3.5 生理生化性狀鑑定試驗… … … … … … … … … … … … … … … 16
3.5.1 革蘭氏染色… … … … … … … … … … … … … … … … … .… 16
3.5.2 氧化酶試驗… … … … … … … … … … … … … … … … .… … 16
3.5.3TSI 試驗… … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 17
3.5.4 Citrate utilization試驗… … … … … … … … … … … … … … 17
3.5.5 MR 試驗… … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 17
3.5.6 VP 試驗… … … … … … … … … … … … … … … … .… ..… … 18
3.5.7 Indole 試驗… … … … … … … … … … … … … … … .… … … . 18
3.5.8 API 20E system … … … … … … … … … … … … … … … … … 18
3.6DNA 萃取… … … … … … … … … … … … … … … … … .… … … . 19
3.7 16SrRNA 序列分析… … … … … … … … … … … … … … … … … 19
v
3.7.1 PCR 的原理… … … … … … … … … … … … … … … … … … 19
3.7.2PCR 增幅條件與程序… … … … … … … … … … … … … … 19
3.7.3PCR 產物電泳分析… … … … … … … … … … … … … … … 20
3.7.4PCR 產物定序、比對及分析… … … … … … … … … … … 20
3.8 抗菌劑感受性試驗… … … … … … … … … … … … … … … … .... 20
3.8.1 抗菌劑溶液製備… … … … … … … … … … … … … … … … . 20
3.8.2 抗菌劑最小抑制濃度測試............................................... 21
第4 章結果… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 23
4.1 生化性狀鑑定… … … … … … … … … … … … … … … … … … … . 23
4.2API 20 E之生化鑑定套組… … … … … … … … … … … … … .… . 23
4.3 PCR 鑑定… … … … … … … … … … … … … … … … … … … ...… 23
4.4 親緣性關係分析… … … … … … … … … … … … … … … … … … 24
4.5 抗菌劑最小抑制濃度試驗… … … … … … … … … … … … … … 24
第5 章討論… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … ... 53
參考文獻… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … . 58

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