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以日本腦炎病毒第三非結構蛋白基因片段為標的,5941及6053之寡核甘酸
為引子的反轉錄聚合脢鏈反應(RT-PCR),用瓊膠電泳產物132-bp去氧核醣
核酸(DNA)來偵測日本腦炎病毒,其敏感性可達250PFU,專一性可區別其他
黃病毒科之病毒,尤其不會與登革病毒四類型反應。以此方法可測定到臺
灣已知分離到的日本腦炎病毒14株,包括從人腦、豬血及蚊子分離的 , 以
及疫苗中山株,且全部15株的132-bp DNA 產物,經直接核甘酸序列分析,
有95% 以上與已知的日本腦炎病毒株S982序列相同, 證實為日本腦炎病毒
無誤及此法的可信。於民國八十三年夏季七月下旬至九月上旬採集臺灣北
部縣市養豬場豬舍附近兩百公尺內的蚊子幼蟲, 在實驗室內室溫28度培養
至成蟲, 並以糖水繼續餵食6-10天, 冰倒後, 在顯微鏡下鑑定種類, 按定
點、蚊種、雌雄 , 每10隻一組, 保存於 -70度冰箱o 採集地點包括臺北
市五區、臺北縣十鄉鎮、桃園縣五鄉鎮、宜蘭縣三鄉鎮、新竹縣二鄉鎮及
苗栗縣竹南養豬科學研究所, 約二十六處, 共七屬十種蚊子, 4542隻,
515 組。樣本磨碎後 , 抽取核醣核酸 (RNA), 以上述反轉錄聚合脢鏈反
應的方法偵測有無日本腦炎存在, 結果白線斑蚊269 組有104 組陽性, 陽
性綠35.1%;熱帶家蚊 121 組有43組陽性, 陽性率35.5%;白腹叢蚊34組
有7 組陽性, 陽性率20.6 %;花翅家蚊27組有5 組陽性, 陽性率18.5%;黃
尾家蚊13組有5 組陽性, 陽性率38.5%;雙角家蚊8 組有3 組陽性, 陽性
率37.5%;海氏家蚊3 組有1 組陽性, 陽性率333.3%;灰胸家蚊1 組有1 組
陽性,陽性率100%; 三斑家蚊10組及新黑小蚊2 組為陰性。總共有159 組
陽性, 總陽性率30.9% 。再以內引子5976及引子6053兩寡核甘酸將此159
組及陰性365 組中14組樣本產物再做巢式聚合脢鏈反應(Nest-PCR)結
果159 組均產生97-bp 的DNA 帶, 更加肯定為陽性; 陰性14組則無此97-
bp DNA 帶。同時將159 組陽性(RT- PCR)樣本中的13組產物(132-bp DNA)
純化, 直接核甘酸序列分析, 結果與已知的日本腦炎病毒株S982序列
有95% 以上相同, 證實為日本腦炎病毒無誤。由以上結果顯示日本腦炎病
毒在臺灣北部自然族群蚊體內有很高比率及普遍性的垂直傳遞現象存在。
不過是否日本腦炎病毒在各種蚊體內有不同比率的垂直傳遞現象, 此病毒
是否會再由這些蚊子傳給宿主, 需實驗進一步證明。未來也需再做病毒分
離的工作。
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