摘要
當生物體的DNA受到放射或離子化作用後會受到傷害,尤其是當 作用 於腺嘧啶,會形成腺嘧啶環飽和的氧化產物,其中尤以 thymidine glycols (Tgs)最容易形成 。許多生物氧化作用於DNA上 的 研究頗多,如DNA含有Tgs時,會中止DNA的繼續複製。
使用酵素免疫連結吸附法測Tgs的濃度或許可以了解DNA受氧化 的 程度。從被免疫作用過的實驗動物,取脾臟進行細胞融合,利用 間接 型免疫連結吸附法,共獲得六株單株抗體Tg3H11.3, Tg3 H11.9,Tg3H11.14,Tg3H11.17,Tg2D5和Tg2H2;它們對 Tgs- BSA具很高的親和性,且不會與BSA產生交叉反應;經由 isotyping kit及西方點墨法得知,這些單株抗體產生的免疫球蛋白 均 屬於IgM,k輕鏈。利用競爭型免疫連結吸附法,以Tgs-BSA 當作 抑制物對Tg3H11.17這株細胞進行反應,抑制作用達50 % 時 的濃度 是3.1 pmol,而其它細胞株約15 pmol。以Tgs當抑制劑作 用於Tg3 H11.17細胞株時,抑制作用50 % 時的濃度是9 mmol, 而dT抑制作 用50 % 時的濃度> 50 mmol,表示Tg3H11.17這株細 胞認得的抗原 決定位部分可能位於Tgs-BSA六碳環上的氫氧基、 部分位於 glutaraldehyde與Tgs鍵結的位置。 其它細胞株雖沒有 Tg3H11.17這 細胞株對Tgs專一性高,但是也會辨認Tgs ,且dT 對他們的抑制作 用也很低。
由以上的結果得知抗Tgs-BSA單株抗體對Tgs具專一性,然為了 明 白抗Tgs-BSA單株抗體與Tgs之間的作用關係,所以利用RT- PCR方 法去分析對Tgs最具專一性的單株抗體Tg3H11.17,分析 其重鏈基 因多變異區的胺基酸序列,並與Kabat發表的免疫球蛋白 基因序列比 對,發現此細胞株變異度最大的區域位於CDR上,且 重鏈多變異區 使用的是次群 (subgroup) II A基因。
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