臺灣博碩士論文加值系統

螢光增白劑（fluorescent whitening agents）功能為增加潔白的效果，大量被使用於清潔劑相關產品、紡織、造紙、塑膠染色等工業上，已有30 餘年。螢光增白劑能吸收波長300~400nm近紫外線（near ultraviolet rays, NUV），再放射出波長為420~480nm的藍紫色螢光。人造合成螢光增白劑的使用造成環境嚴重的危害，而其中二苯乙烯型螢光增白劑佔大多數的使用量。因此如何處理水體中的螢光增白劑，以及積極研發生物分解性的螢光增白劑，已成為各國研究的重點之一。本研究目的：從環境中分離出具有高效率降解二苯乙烯型螢光增白劑2S（fluorescent brightener 28,FB28）、4S（fluorescent brightener 220,FB220）、6S（fluorescent brightener 357,FB357）的菌株，並進行菌種鑑定和生理、生化特性分析，以及探討降解螢光增白劑2S、4S、6S的效率。實驗中已分離出7株菌株，具有降解2S、4S或6S的能力。實驗利用16S rDNA序列比對分析，初步確認這些菌株的親緣演化，再進一步藉由TLC片、螢光強度、高效液相層析儀探討這些菌株降解2S、4S、6S的效率，希望篩選出具有高效降解2S、4S、6S效率的菌株，以作為處理含有螢光增白劑2S、4S、6S的汙水。在實驗結果發現目標菌株在培養20天具有20~30%的降解率。未來實驗規劃將以反應曲面法（response surface methodology, RSM）來設計環境因子並找出最適降解螢光增白劑的條件，以減少環境污染。

The function of fluorescent whitening agents（FWAs） has been use to increase bright of textiles, paper, plastics and other industrial dyeing, for more than 30 years. FWAs can absorb 300 ~ 400nm of near-ultraviolet rays wavelength, and then emit a blue-violet wavelength（420 ~ 480nm） fluorescence. The use of artificial synthetic stilbene FWAs causes serious damage of natural environments. Therefore, how to deal with FWAs pollution in environment, and develop actively biodegradable FWAs, become one of the important researches. The study is aimed to isolate strains with high efficiency of degrading stilbene fluorescent brightener 2S（fluorescent brightener 28, FB28）, 4S（fluorescent brightener 220, FB220）, 6S（fluorescent brightener 357, FB357） from a variety of environments. Seven isolates were been identified and characterized with molecular, physiological, and biochemical analyses, and also investigated the degradation ability of FWAs 2S, 4S or 6S. Experiments including TLC plates, Fluorescence intensity, and high performance liquid chromatography（HPLC） to analyze the degradation of 2S, 4S, and 6S were carried out. The result indicate target strains have 20% to 30% degradation rate after 20 days. The future work will design response surface methodology（RSM） simulating environmental factors and find the optimal degrading conditions of fluorescent brightener for reducing environmental pollution by FWAs.

摘要 I
Abstract II
目錄 III
表目錄 VI
圖目錄 VII
一、前言 1
1.1 螢光增白劑特性與應用 1
1.2 螢光增白劑的演變 3
1.3螢光增白劑使用的概況 4
1.4螢光增白劑對生物體的影響 4
1.4.1 皮膚 5
1.4.2 致癌 5
1.4.3抑制傷口癒合 5
1.4.4代謝 6
1.5螢光增白劑對環境的影響 6
1.6 本研究使用的螢光增白劑 7
1.7研究目的 9
二、材料與方法 10
2.1實驗藥品與儀器設備 10
2.1.1實驗藥品 10
2.1.2儀器設備 11
2.2菌株來源與培養 12
2.2.1採樣地點 12
2.2.2菌株來源 13
2.3菌株篩選與培養 13
2.3.1固態篩選法 14
2.3.2液態篩選法 14
2.4實驗所使用之培養基 15
2.5菌種鑑定 17
2.5.1 染色體抽取 17
2.5.2連鎖聚合酶反應（Polymerase Chain Reaction； PCR） 19
2.5.3序列比對分析 19
2.6生長曲線測定 20
2.7生化特性分析 20
2.7.1溫度生長範圍測試 20
2.7.2酸鹼值生長範圍測試 20
2.8螢光增白劑分解測試實驗 21
2.8.1螢光強度測試 21
2.8.2薄層層析法（Thin-Layer Chromatography；TLC）分析方法 22
2.8.3螢光增白劑之高效液相層析儀分析方法 23
2.8.3.1高效能液相層析標準品的製備 23
2.8.3.2高效能液相層析樣品前處理步驟 23
2.8.3.3高效能液相層析儀設定參數 23
2.8.4化學需氧量（Chemical Oxygen Demand ；COD）測試實驗 24
三、結果 25
3.1菌株篩選結果 25
3.1.1固體篩選法 25
3.1.2液態篩選法 25
3.2菌種鑑定結果 26
3.3生長曲線測定 26
3.4生化特性分析結果 27
3.4.1 溫度生長範圍測試 27
3.4.2 酸鹼值生長範圍測試 27
3.5螢光增白劑分解測試實驗 28
3.5.1螢光強度測試結果 28
3.5.1.1檢量線 28
3.5.1.2 螢光強度測量結果 28
3.5.2薄層層析法分析結果 29
3.5.3高效能液相層析分析 29
3.5.3.1定性、定量及偵測極限 29
3.5.3.2檢量線製作 29
3.5.3.3回收率探討 30
3.5.3.4高效能液相層析結果 30
3.5.4化學需氧量測試 31
四、實驗討論 31
實驗之圖與表 37
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