|
牛腎臟粗萃取液在pH7.0 幾乎測不到活性，用0.5N HSO滴定到pH3.0 後，可使
活性顯現出來，用20﹪∼50﹪硫酸銨將pH3.0 之粗萃取液沈澱，接下來經過 DEAE
cellulose，Sephadex G-100，DEAE cellulose Ca affinity elution ，和免疫
親合等管柱(rabbit anti-pancreatic DNase immuno-affinity column) 純化倍數
300,000 倍，比活性約900 倍。在SDS-PAGE電泳上用銀染色可看見33KD和32KD位置
有兩個蛋白帶，在西氏點墨法(Western blotting)兩個分子量皆與單株抗體有反應
，在活性染色亦皆有活性。因此這兩個蛋白帶皆為DNase，將純化後牛腎臟的DNase
做胺基酸組成分析，與牛胰臟的DNase 非常相似，用等電點焦集電泳法(IEF) 。可
見牛腎中DNase 亦為多樣型(multiple forms)，pI約在5.6-4.4 之間。
將腎臟粗萃取液、牛尿、牛血清通過免疫親合管柱，用單株抗體做西氏點墨法和活
性染色發現尿中有33KD DNase，腎中有33KD、32KD兩種DNase ，血清中有 32KD 的
DNase ，用單株抗體做腎臟組織切片染色發現腎中DNase位於髓質遠曲小管(distal
tubule) 、和收集管(collecting tubule) 的細胞質中，因此推測尿中DNase 來源
可能是腎臟合成所釋出。
|