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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:王懿丞
研究生(外文):Yi-Cheng Wang
論文名稱:食藥用真菌-蓮花菌菌絲體及多醣體發酵產程之研究
論文名稱(外文):Production of Mycelium and Polysaccharide from the Edible and Medicinal Fungus Grifola frondosa by Submerged Fermentation
指導教授:徐泰浩徐泰浩引用關係
指導教授(外文):Tai-Hao Hsu
學位類別:碩士
校院名稱:大葉大學
系所名稱:食品工程學系碩士班
學門:農業科學學門
學類:食品科學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2003
畢業學年度:91
語文別:中文
論文頁數:189
中文關鍵詞:藥用真菌蓮花菌多醣體菌絲體浸液發酵培養基分離純化
外文關鍵詞:medicine fungusGrifola frondosapolysaccharidesmyceliumliquid culturemediumchromatography
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摘 要
蓮花菌(Grifola frondosa)又稱灰樹花、舞茸等,屬於非摺菌目、多孔菌科、豬苓屬,是木生腐敗菌種的好氣性真菌,其多醣體具有抗腫瘤、降血壓、降血脂、治療肝炎、減肥、糖尿病等功效,以具有β-1,6支鏈之β-1,3葡聚糖為其生物活性主要成份,在其子實體及菌絲體均有此結構的多醣體。一般人工栽培由接種到生成子實體需要3個月以上的時間,應用發酵技術生產菌絲體及生物多糖體,具有發酵時間短、品質穩定等優點。本研究主要探討:(一)、篩選不同品系之最適產醣蛋白質之菌株,並分析其游離胺基酸、總胺基酸、主要元素(C, N, O)含量及酵素群活性;(二)、探討蓮花菌在搖瓶與靜置培養時,在不同培養條件下對生物質量、胞內與胞外粗多醣蛋白質複合物之影響;(三)、比較合成、半合成培養基培養前後之粗多醣蛋白質複合物與游離胺基酸差異;(四)、以搖瓶培養探討產程變化,並再擴展到5L、20L發酵槽階段。
研究結果顯示:不同品系蓮花菌株比較,在PDA培養時以CCRC 36434生長直徑對大,以PDB與基礎培養基培養以CCRC 36355胞內多糖體產量最高,以PDB培養胞外多糖體以CCRC 36357最高;以游離胺基酸含量,顯示CCRC 36355含量最高。總胺基酸以CCRC 36434含量最高;酵素群譜分析,以胞內酵素群酵素含量最高,不同品系蓮花菌株酵素含量和種類不相同。振盪培養時,胞內多糖體以碳源為4%葡萄糖、氮源為0.1%草酸胺、其它添加物為0.15%磷酸氫鉀能有最高產量;游離胺基酸含量在碳源為3%蔗糖、氮源為0.2%草酸銨、其它添加物為0.45%磷酸氫鉀最佳。半化學合成培養基氮源含量,以胞內多糖體以0.2%蛋白胨、胞外多糖體以0.4%酵母萃出物、菌絲體生物質量以0.8%胰蛋白最佳。靜置培養時,胞內多糖體以碳源為3%果糖與氮源為0.2%硝酸銨最佳;游離胺基酸含量在碳源為4%甘露糖醇、氮源為0.4%草酸銨最高。探討產程,以搖瓶培養EPS在第11天最高,以5公升、 20公升發酵槽皆在第5天達最高量。在5公升發酵槽培養之游離胺基酸含量以第2天最高,隨時間延長,胺基酸含量減少。胞外多糖體與胞內多糖體在經陰離子交換樹脂可得正電荷之多糖體蛋白質複合物;胞內多糖體有少許負電荷之多糖體蛋白質複合物
ABSTRACT
Grifola frondosa in Japan as maitake (dancing mushroom), in China as gray tree flower, it is a Basidiomycete fungus belonging to the order Aphyllopherales, and family Polyporaceae, as a white-rot and acreobe fungus. It is polysaccharides have been reported in many research articles include antitumor, immunological enhanc- ement, antidiabetic and anti-HIV, etc. A β-(1-3)-linked glucan with branches of β-(1-6)-D-glucose showing the main of pharma- cological activity has been isolated from fruit bodies and mycelium. By synthetic-log cultivation, when the young mycelium grown to fruit body need of three months.according to the related studies, employing mycelium of the submerged culture to grow the fungus has the advantages of the shorter growth time, better product quality, and lower cost. This study investigates the process of the growth of Grifola frondosa in terms of the following issues:(1)to screen different strains producing polysaccharides and analysis of free amino acid、total amino acid、main element (C、N及O)、enzyme activity;(2)studies biomass、extracellular polysaccharide and intracellular polysaccharide under shaking and static bottles;(3)to compare of the free amino acid and polysaccharides by the chemical and semi-chemical medium;(4) effect of submerged fermentation in shaking bottles, and to expand of 5 and 20L fermentor.
The study shows that, in PDA culture, the CCRC 36434 have the best growing speed of the colony, in PDB and base medium culture, the CCRC 36355 have best yields of intracellular poly- saccharides, CCRC 36357 which yields the highest content of extracellular polysaccharide;in content of free amino acid, shows the higher of CCRC 36355;in content of total amino acid by mycelium, the higher of CCRC 36434;in api-ZYM system, intracellular enzyme have higher activity;in shaking culture by chemical medium , the highest intracellular polysaccharides is achieved under the condition of 4﹪glucose, 0.1﹪ammonium oxalate, 0.15﹪potassium phosphate, the highest the free amino acid is achieved under the condition of 3﹪sucrose, 0.2﹪ammonium oxalate, 0.45﹪potassium phosphate;in shaking culture by semi- chemical medium , the highest intracellular polysaccharides is achieved under the condition of 0.2﹪peptone, the highest extra- cellular polysaccharides is 0.4﹪yeast extract, the highest the mycelium biomass is 0.8﹪tryptone;in static culture, the highest intracellular polysaccharides is achieved under the condition of 3﹪fructose, 0.2﹪ammonium nitrate, the highest the free amino acid is achieved under the condition of 4﹪mannose, 0.4﹪ammonium oxalate;studies submerged fermentation, the higher extracellular polysaccharides on day 11 by shaking culture and 5、20L fermentor on day 5;in 5L fermentor, free amino acid have best yield on day 2, the free amino acid follow time to decreased. extracellular polysaccharides and intracellular polysaccharides contain acidic glucan by ion exchange chromatography and intracellular polysaccharides contain less basic glucan.
目 錄
封面內頁 頁次
簽名頁
授權書1……………………………………………………………iii
授權書2….…………………………………………………………iv
中文摘要……………………………………………………………..v
英文摘要…………………………………………………………...vii
誌謝……………………………………………………………….….x
目錄………………………………………………………………….xi
圖目錄……………………………………………………………..xxi
表目錄……………………………………………………………xxv
附錄……………………………………………………………..xxxiii
壹、前 言.…………………………….…………………………….1
貳、文獻回顧….…………………..…………………………...…….3
2.1 蓮花菌之分類地位………………………………….…….3
2.2 蓮花菌之生活史與特徵…………………………….…….3
2.2.1 型態特徵………………………...……………………3
2.2.2 生態環境...……………………………………………4
2.3 蓮花菌之化學組成…………………………..…………...5
2.3.1 一般化學組成………………………………………...5
2.3.2 無機成分……………………………………………...5
2.3.3 游離胺基酸…………………………………………...5
2.3.4 游離糖類……………………………………………...7
2.3.5 有機酸………………………………………………...7
2.3.6 脂質………………………………………………….7
2.3.7 紅血球凝集素……………………………………….8
2.3.8 酵素………………………………………………….8
2.3.9 核苷酸……………………………………………….8
2.4 蓮花菌之多糖體種類……………………………………9
2.4.1 蓮花菌之子實體的多醣體………..……………..…9
2.4.2 菌絲體的抗腫瘤多醣……………………………....10
2.5 蓮花菌菌絲體之液態培養………………………………11
2.5.1 培養基組成……………………………………...…..11
2.5.2 液態生長條件……………………………………….15
2.5.3 蓮花菌子實體之生長條件…………………………16
2.6 藥用真菌多醣體之萃取、純化及分析方法……………18
2.6.1 胞內粗多醣體的萃取方法…………………………18
2.6.2 多醣體的分析方法……………………….…………19
2.7 蓮花菌之藥理作用…………………………….………...21
2.7.1 抗腫瘤作用……………………………….…………21
2.7.2 癌細胞毒性作用………………………….…………23
2.7.3 免疫作用………………………………….…………23
2.7.4 抗人體免疫不全病毒(HIV)作用…….…………24
2.7.5 抗高血壓作用…………………………….…………24
2.7.6 抗糖尿病作用…………………………….…………25
2.7.7 抗高血脂作用…………………………….…………25
2.7.8 減肥……………………………………….…………26
2.7.9 保肝作用………………………………….…………26
2.8 藥用真菌菌絲體之浸液培養……………………………27
2.8.1 真菌絲狀菌絲影響因子…………………………….27
參、材料與方法……………………………………………………30
3.1 試驗菌株…………………………………………………30
3.2 菌種保存與更新…………………………………………30
3.3 菌株篩選與特徵化………………………………………30
3.4 基礎培養基………………………………………………30
3.5 以振盪液態培養生產菌絲體及菌液多醣體或多醣體
蛋白質複合物之影響最適培養基質試驗……………..31
3.5.1 不同碳源之影響…………………………………….31
3.5.2 不同氮源之影響…………………………………….31
3.5.3 不同添加物與條件之影響…………………………31
3.6 震盪培養半合成培養基對菌絲體及菌液多醣體或多
醣體蛋白質複合物之影響………………………...……32
3.7 靜置培養對菌絲體及菌液多醣體或多醣體蛋白質複
合物之影響…………………………………………...…32
3.7.1 不同碳源之影響…………………………………….32
3.7.2 不同氮源之影響…………………………………….32
3.8 分析方法…………………………………………………32
3.8.1 菌絲體之生物質量………………………………….32
3.8.2 酒精沉澱…………………………………………….32
3.8.3 酚-硫酸法分析總醣………………………………33
3.8.4 還原醣的測定……………………………………….33
3.8.5 游離胺基酸步驟:……………...………………….34
3.8.6 總胺基酸步驟:………………………………………34
3.8.7 元素分析…………………………………………….34
3.8.8 api-ZYM……………………………………………...35
3.9 菌絲體水溶性胞內多醣體之萃取方法………………...35
3.9.1菌絲體之熱水萃取…………………………………..35
3.9.2菌絲體之冷鹼萃取…………………………………..35
3.10利用離子交換樹脂探討生物活性多醣體或多醣體蛋
白質複合物製備技術…………………………………...36
3.10.1多醣前處理…………………………………………36
3.10.2試驗方法…………………………………………….36
3.11五公升小型發酵槽生產條件之探討…………………...37
3.12二十公升大型發酵槽生產條件之探討………………...37
3.13 動力參數命名法………………………………………..37
肆、結果與討論…………………………………………………….38
4.1 蓮花菌六株品系之比較…………………………………38
4.1.1蓮花菌六株品系之型態特徵與生長速率比較…….38
4.1.1.1以PDA培養基培養蓮花菌六株品系之比較….38
4.1.1.2 PDB培養對培養蓮花菌不同品系發酵參數之
影響…………………………………………….41
4.1.1.3基礎培養基對蓮花菌不同品系之比較發酵參
數之影響……………...…………………………41
4.1.2游離胺基酸………………………………………….44
4.1.2.1不同品系蓮花菌發酵培養液中游離胺基酸含
量之比較…………...……………………………44
4.1.2.2不同品系蓮花菌發酵培養液中必須胺基酸和
非必須胺基酸含量之比較……………………..44
4.1.2.3複合培養基(YMK)對蓮花菌(CCRC 36355)
發酵培養液中游離胺基酸含量比較………….47
4.1.3總胺基酸…………………………………………….49
4.1.3.1不同品系蓮花菌發酵培養液中總胺基酸含量
之比較…….……………………………………..49
4.1.3.2不同品系蓮花菌發酵培養液中總胺基酸中必
須胺基酸和非必須胺基酸含量之比較………..49
4.1.3.3複合培養基對蓮花菌(CCRC 36355)菌絲體及
發酵培養液總胺基酸之影響………….……….52
4.1.4菌絲體之元素分析…………………………………..54
4.1.5酵素群譜分析………………………………………..56
4.5.1不同蓮花菌菌株胞外酵素群………………………..56
4.1.5.2不同蓮花菌菌株胞內酵素群…………………...61
4.1.5.3不同蓮花菌胞內和胞外混合酵素群…………..67
4.1.5.4 0、18及23小時觀察對api ZYM酵素試劑套
組特徵化蓮花菌菌株胞內酵素群的差異……..72
4.1.5.5培養基對蓮花菌菌株之胞內酵素群…………..78
4.2 振盪培養時培養基中碳源和氮源對蓮花菌CCRC
36355菌絲體生質、多醣體與游離胺基酸含量之影響.83
4.2.1化學合成培養基中碳源種類與濃度………………..83
4.2.1.1葡萄糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..83
4.2.1.2果糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響…..84
4.2.1.3乳糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響….84
4.2.1.4麥芽糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響.86
4.2.1.5甘露醣醇濃度對菌絲生長及多醣體生成之
影響………..………………………………...86
4.2.1.6蔗糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響…..88
4.2.2化學合成培養基中氮源種類與濃度………………..88
4.2.2.1氯化銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..88
4.2.2.2硝酸銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..90
4.2.2.3草酸銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..90
4.2.2.4磷酸銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..92
4.2.2.5硫酸銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..92
4.2.3微量元素溶液濃度、硫酸胺濃度、橄欖油、磷酸
氫鉀、檸檬酸及接種量對菌絲體生質及多醣體生
成之影響……………………………………………95
4.2.3.1微量元素溶液濃度對菌絲生長及多醣體生成
之影響…………………………….……………95
4.2.3.2硫酸鎂濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..95
4.2.3.3橄欖油濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..97
4.2.3.4磷酸氫鉀濃度對菌絲生長及多醣體生成之
影響…………………..………..………………...97
4.2.3.5檸檬酸濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..99
4.2.3.6接種量濃度濃度對菌絲生長及多醣體生成之
影響……………..………………………….101
4.2.4在半化學合成培養中因不同氮源濃度之影響…101
4.2.4.1蛋白胨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響……..…………………………………..…….101
4.2.4.2麥芽萃取物濃度對菌絲生長及多醣體生成之
影響…………………………………………….103
4.2.4.3胰蛋白濃度對菌絲生長及多醣體生成之
影響…………………………………………….103
4.2.4.4酵母萃取物濃度對菌絲生長及多醣體生成之
影響………………………………………….…103
4.2.5培養基中碳源與氮源對蓮花菌CCRC 36355搖
瓶培養液中游離胺基酸生成之影響..….……….105
4.2.5.1碳源……………………………………………105
4.2.5.2氮源……………………………………………108
4.2.5.3其它添加物……………………………………111
4.2.6 半化學合成培養基………………………………114
4.2.6.1培養基中麥芽萃取物濃度對游離胺基酸含量
探討…..……...…………………………………114
4.2.6.2培養基中蛋白胨濃度對游離胺基酸含量探
討……………………………………………….114
4.2.6.3培養基中胰蛋白濃度對游離胺基酸含量探討……………………………………………….117
4.3 靜置培養時培養基中碳源與氮源對蓮花菌CCRC
36355菌絲體生質、多醣體與游離胺基酸含量之影響……………………………………………………….123
4.3.1化學合成培養中碳源種類與濃度…………………123
4.3.1.1葡萄糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響………………..………………………..…….123
4.3.1.2果糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響…123
4.3.1.3乳糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..126
4.3.1.4蔗糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響..126
4.3.1.5麥芽糖濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響…….……..……………………………..……126
4.3.1.6甘露糖醇濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響……………………………………………….130
4.3.2化學合成培養中碳源種類與濃度………………130
4.3.2.1硝酸銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響130
4.3.2.2草酸銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響133
4.3.2.3磷酸銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響133
4.3.2.4氯化銨濃度對菌絲生長及多醣體生成之影響133
4.3.3培養基中碳源與氮源對蓮花菌CCRC 36355靜置
培養液中游離胺基酸生成之影響………………….137
4.3.3.1碳源…………………………………………137
4.3.3.2氮源…………………………………………139
4.4發酵產程之探討………………………………………144
4.4.1搖瓶培養…………………………………………….144
4.4.2 5L發酵槽…………………………………………144
4.4.3 20L發酵槽…………………………………………147
4.4.4 5L發酵槽之培養天數對蓮花菌之游離胺基酸含
量之影響……………………..…………………147
4.5蓮花菌之粗多醣蛋白質複合物之純化流程建立…….152
4.5.1 0.5﹪NaOH與0.5﹪urea溶解之胞外多醣蛋白複
合物分離組份(DEAE-Separose CL-6B column)….152
4.5.2經U.V.照射2小時Grifola frondosa 胞外粗多糖
體之 DEAE Separose CL-6B陰離子交換樹脂層
析之溶離組份……………………………………….152
4.5.3 8M urea溶解之胞外多醣蛋白複合物分離組份(DEAE Sephadex A-25 column)…………………152
4.5.4經U.V.照射2小時之Grifola frondosa 胞外粗多
糖體之DEAE Separose CL-6B陰離子交換樹脂層
析之溶離組份……………………………………….156
4.5.5 2M urea溶解之胞內多醣蛋白複合物分離組份
(DEAE Sephadex A-25 column)……………………156
4.5.6利用Ohno et al.,1986之方法處理Grifola frondosa
胞外粗多糖體後之DEAE Sephadex A-25陰離子交
換樹脂層析圖……..………………………………….156
4.5.7利用Ohno et al., 1986之使用8M urea處理粗胞外
多醣蛋白質複合物以DEAE-Sephadex A-25陰離子
交換樹脂層析圖………………………………………160
4.5.8利用Ohno et al., 1986之使用2M urea處理粗胞內
多醣蛋白質複合物以DEAE-Sephadex A-25陰離子
交換樹脂層析圖…………………………...………….161
伍、結論………………………………………………………….163
參考文獻………………………………………………………….165
附錄………………………………………………………………..184
圖目錄
圖一 蓮花菌不同品細菌株於PDA培養(25℃)之菌落大小..39
圖二 Grifola frondosa不同品系於PDA培養基25℃培養20
天之菌落型態………………………………………..…...…40
圖三 複合培養基(YMK)對蓮花菌(CCRC 36355)發酵
培養中游離胺基酸含量比較…………………………….…48
圖四 複合培養基對蓮花菌(CCRC 36355)菌絲體及發酵培
養液總胺基酸之影響……………………………………….53
圖五 利用api-ZYM酵素試驗套組特徵化不同品系蓮花菌菌
株與蛹蟲草胞外酵素群……………………………….……57
圖六 利用api-ZYM酵素試驗套組特徵化不同品系蓮花菌菌
株與蛹蟲草胞內酵素群……………………………….……62
圖七 利用api-ZYM酵素試驗套組特徵化不同品系蓮花菌菌
株與蛹蟲草胞內加胞外酵素群……………………………68
圖八 培養基種類對蓮花菌CCRC 36355之胞內酵素群………79
圖九 不同葡萄糖濃度化學合成培養基於25℃下靜置培養30
天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、胞內與胞
外粗多醣體及還原醣含量之變化……………………..…124
圖十 不同果糖濃度化學合成培養基於25℃下靜置培養30
天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、胞內與
胞外粗多醣體及還原醣含量之變化……………………..125
圖十一 不同乳糖濃度化學合成培養基於25℃下靜置培養
30天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、胞
內與胞外粗多醣體及還原醣含量之變化…………….127
圖十二 不同蔗糖濃度化學合成培養基於25℃下靜置培養
30天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、胞
內與胞外粗多醣體及還原醣含量之變化…………….128
圖十三 不同麥芽糖濃度化學合成培養基於25℃下靜置培
養30天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體及還原醣含量之變化………….129
圖十四 不同甘露糖醇濃度化學合成培養基於25℃下靜置
培養30天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質
量、胞內與胞外粗多醣體及還原醣含量之變化…..….131
圖十五 不同硝酸銨濃度化學合成培養基於25℃下靜置培
養30天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體及還原醣含量之變化………….132
圖十六 不同草酸銨濃度化學合成培養基於25℃下靜置培
養30天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體及還原醣含量之變化………….134
圖十七 不同磷酸銨濃度化學合成培養基於25℃下靜置培
養30天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體及還原醣含量之變化………….135
圖十八 不同氯化銨濃度化學合成培養基於25℃下靜置培
養30天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體及還原醣含量之變化………….136
圖十九 蓮花菌CCRC36355於搖瓶培養產程中其菌絲體生
物質量、培養基中pH值與還原糖(a圖);胞外與
胞內多醣體(b圖)之變化…………………………...145
圖二十 蓮花菌CCRC36355於5公升發酵槽培養產程中其
菌絲體生物質量、培養基中pH值與還原糖(a圖);
胞外與胞內多醣體(b圖)之變化……………………....146
圖二十一 蓮花菌CCRC36355於20公升發酵槽培養產程中
其菌絲體生物質量、培養基中pH值(a圖);胞
外與還原糖(b圖)之變化……………………………148
圖二十二 0.5﹪NaOH與0.5﹪urea溶解之胞外多醣蛋白複
合物分離組份(DEAE-Sepharose CL-6B column)..153
圖二十三 經U.V.照射2小時Grifola frondosa 胞外粗多糖
體之DEAE Sepharose CL-6B陰離子交換樹脂層
析之溶離組份……………………………………….154
圖二十四 8M urea溶解之胞外多醣蛋白複合物分離組份(DEAE Sephadex A-25 column)……………….…155
圖二十五 經U.V.照射2小時之Grifola frondosa 胞外粗多
糖體經DEAE Sephadex A-25陰離子交換樹脂層
析之溶離組份……………………………………….157
圖二十六 2M urea溶解之胞內多醣蛋白複合物分離組份(DEAE Sephadex A-25 column)………………….158
圖二十七 利用Ohno et al.,1986之方法處理Grifola frondosa
胞外粗多糖體後之DEAE Sephadex A-25陰離子交
換樹脂層析圖…………………………..…………….159
圖二十八 利用Ohno et al.,1986之方法處理Grifola frondosa
胞外粗多糖體後之DEAE Sephadex A-25陰離子交
換樹脂層析圖……………………………………….161
圖二十九 利用Ohno et al.,1986之方法處理Grifola frondosa
胞內粗多糖體後之DEAE Sephadex A-25陰離子
交換樹脂層析圖…………………………………….162
表目錄
表一 蓮花菌子實體的一般化學組成……………………………..6
表二 不同文獻中蓮花菌液態培養半化學合成培養基成分之
比較…………………………..………..…………………...13
表三 蓮花菌之子實體的生長因子……………….………………18
表四 蓮花菌不同品系以PDB培養之菌絲體生物質量、胞內
與胞外粗多醣體產生、培養基中pH值、還原糖及EPS
比產生量、IPS比產生量於25℃下搖瓶培養14天之比較..42
表五 蓮花菌不同品系以基礎培養基培養之菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體產生、培養基中pH值、還原糖及
EPS比產生量、IPS比產生量於25℃下搖瓶培養14天
之比較……………………………………………………….43
表六 不同品系蓮花菌發酵培養液中游離胺基酸含量比較……45
表七 不同品系蓮花菌發酵培養液中必須胺基酸與非必須胺
基酸含量比較……………………………………………….46
表八 不同品系蓮花菌發酵培養液中總胺基酸含量比較……....50
表九 不同品系蓮花菌發酵培養液之總胺基酸中必須胺基酸與
非必須胺基酸含量比較…………………………………….51
表十 不同品系蓮花菌菌絲體中主要元素分析………………....55
表十一 不同品系蓮花菌菌株與蛹蟲草胞外酵素群以數字表示
酵素活性 …………………………………………………58
表十二 不同品系蓮花菌菌株與蛹蟲草胞外酵素群以數字表示
酵素活性…………………………………………………..60
表十三 不同品系蓮花菌菌株與蛹蟲草胞內酵素群以數字表
示酵素活性………………………………………………..63
表十四 不同品系蓮花菌菌株與蛹蟲草胞內酵素群以強弱代
號表示酵素活性…………………………………………..65
表十五 不同品系蓮花菌菌株與蛹蟲草胞外加胞外酵素群以
數字表示酵素活性………………………………………..69
表十六 不同品系蓮花菌菌株與蛹蟲草胞外加胞內酵素群以
數字表示酵素活性……………….………………….…….71
表十七 18小時後觀察對API-ZYM酵素試劑套組特徵化蓮
花菌菌株胞內加胞外酵素群差異以數字表示酵素活性..73
表十八 18小時後觀察對API-ZYM酵素試劑套組特徵化蓮花
菌菌株胞內加胞外酵素群差異以強弱代號表示酵素活性.…………………………………………………………...74
表十九 23小時後觀察對API-ZYM酵素試劑套組特徵化蓮花
菌菌株胞內加胞外酵素群差異以數字表示酵素活性..…75
表二十 23小時後觀察對API-ZYM酵素試劑套組特徵化蓮花
菌菌株胞內加胞外酵素群差異以強弱代號表示酵素活性………………………………………………….……….76
表二十一 培養基種類對蓮花菌CCRC 36355之胞內酵素群
差異以數字表示酵素活性………………………..…80
表二十二 培養基種類對蓮花菌CCRC 36355之胞內酵素群
差異以強弱代號表示酵素活性………..……………81
表二十三 不同葡萄糖濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化………………………………………………...85
表二十四 不同果糖濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培養
14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數之
變化……………………………………………………85
表二十五 不同乳糖濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培養
14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數之
變化…………………………………………………...87
表二十六 不同麥芽糖濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化…………………………………………………87
表二十七 不同甘露糖醇濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶
培養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質
量、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化………………………………………………...89
表二十八 不同蔗糖濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培養
14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量、
胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數之
變化.……………………………………………….….89
表二十九 不同氯化銨濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化……………………………………………...…91
表三十 不同硝酸銨濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化……………………………………………...…91
表三十一 不同草酸銨濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化………………………………………………...93
表三十二 不同磷酸銨濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化……………………………………………...…93
表三十三 不同硫酸銨濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化……………………………………………...…94
表三十四 不同微量元素濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶
培養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質
量、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參
數之變化……………………………………………...96
表三十五 不同硫酸鎂濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化……………………………………………...…96
表三十六 不同橄欄油濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化………………………………………………...98
表三十七 不同磷酸氫鉀濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶
培養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質
量、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參
數之變化……………………………………………...98
表三十八 不同檸檬酸濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化……………………………………………….100
表三十九 不同接種量濃度化學合成培養基於25℃下搖瓶培
養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質量
、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參數
之變化………..……………………………………...100
表四十 不同蛋白胨濃度半化學合成培養基於25℃下搖瓶
培養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質
量、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參
數之變化…………….………………………………102
表四十一 不同麥芽萃出物濃度半化學合成培養基於25℃下
搖瓶培養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生
物質量、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動
力參數之變化……………………………………….102
表四十二 不同胰蛋白濃度半化學合成培養基於25℃下搖瓶
培養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生物質
量、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動力參
數之變化…………………………………………….104
表四十三 不同酵母萃出物濃度半化學合成培養基於25℃下
搖瓶培養14天對蓮花菌菌絲體之pH、菌絲體生
物質量、胞內與胞外粗多醣體、還原醣含量及動
力參數之變化……………………………………….104
表四十四 培養基中碳源對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶培養液
中游離胺基酸生成之影響……………………….…106
表四十五 培養基中碳源對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶培養液
中游離胺基酸中必須胺基酸與非必須胺基酸含量…………………………………………………….107
表四十六 培養基中氮源對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶培養液
中游離胺基酸生成之影響………………………….109
表四十七 培養基中氮源對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶培養液
中游離胺基酸中必須胺基酸與非必須胺基酸含
量……………………………………………………..110
表四十八 培養基中其他添加物對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶
培養液中游離胺基酸生成之影響………………….112
表四十九 培養基中其他添加物對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶
培養液中游離胺基酸中必須胺基酸與非必須胺基
酸含量……………………………………………….113
表五十 培養基中麥芽萃取物對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶
培養液中游離胺基酸生成之響……………………115
表五十一 培養基中麥芽萃取物對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶
培養液中游離胺基酸中必須胺基酸與非必須胺基
酸含量……………………………………………….116
表五十二 培養基中peptone對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶培
養液中游離胺基酸生成之影響……………………118
表五十三 培養基中peptone對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶培
養液中游離胺基酸中必須胺基酸與非必須胺基酸
含量………………………………………………….119
表五十四 培養基中tryptone對蓮花菌CCRC 36355 搖瓶培
養液中游離胺基酸生成之影響……………………120
表五十五 蓮花菌Grifola frondosa CCRC 36355以不同濃度
之tryptone培養14天之發酵液中游離胺基酸中
必須胺基酸與非必須胺基酸含量探討……………122
表五十六 培養基中碳源對蓮花菌CCRC 36355 靜置培養液
中游離胺基酸生成之影響…………………………138
表五十七 培養基中碳源對蓮花菌CCRC 36355 靜置培養液
中游離胺基酸中必須胺基酸與非必須胺基酸含量…………………………………………………….140
表五十八 培養基中氮源對蓮花菌CCRC 36355 靜置培養液
中游離胺基酸生成之影響…………………………141
表五十九 培養基中氮源對蓮花菌CCRC 36355 靜置培養液
中游離胺基酸中必須胺基酸與非必須胺基酸含量………………………………………………….....142
表六十 Grifola frondosa CCRC 36355利用5L發酵槽培養8
天之發酵液中游離胺基酸含量探討………...…………149
表六十一 Grifola frondosa CCRC 36355利用5L發酵槽培養
8天之發酵液中游離胺基酸中必須胺基酸與非必
須胺基酸含量………………………………...……..150
附錄
附錄一、不同碳源於25℃下搖瓶培養14天對生物質量、胞外
多醣體及胞內多醣體之整理……………………………184
附錄二、不同氮源於25℃下搖瓶培養14天對生物質量、胞外
多醣體及胞內多醣體之整理……………………………185
附錄三、不同其他添加物於25℃下搖瓶培養14天對生物質量
、胞外多醣體及胞內多醣體之整理……………………186
附錄四、在化學和半化學培養基中不同氮源對生物質量、胞外
多醣體及胞內多醣體之整理……………………………187
附錄五、不同品系蓮花菌菌株與蛹蟲草胞內酵素群以數字表示
酵素活性之API-ZYM酵素系統之類緣關係以交叉比
較法分類…………………………………………………188
附錄六、不同品系蓮花菌菌株與蛹蟲草胞內酵素群以強弱代號
表示酵素活性之API-ZYM酵素系統之類緣關係以交
叉比較法分類…………………………...……………….189
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