臺灣博碩士論文加值系統

台灣原生種土肉桂(Cinnamomum osmophloeum Kaneh)為台灣特有之樟科喬木，生長於海拔400-1500 m的天然闊葉林中，台灣土肉桂葉傳統民間用藥用於治療發炎、腸道感染、糖尿病等，先前本實驗室研究小組以報告類黃酮醣苷(kaempferol glycoside)已有抗發炎、糖尿病等生理活性，所以本研究使用毛細管電泳定量方法，以兒茶素為內標準品分析土肉桂葉中三種類黃酮醣苷kaempferitrin (C1), kaempferol3-O-β-D-glucopyranosyl-(1-4)-α-L-rha mnopyranosyl-7-O-α-L–rhamnopyranoside (C2), and kaempferol3-O-β-D-apio furanosyl-(1-2) –α -L-arabinofuranosyl-7-O- α-L-rhamnopyranoside (C3)，毛細管電泳分析最佳條件為四硼酸納鹽緩衝溶液濃度35 mM， pH 9.8，分離電壓25 kV，樣品注射時間5 s，溫度25 ºC，每一種化合物濃度範圍0.075–0.6 mg/mL (C1, C2 and C3)來進行分析，此方法已建立應用於分析土肉桂葉中三種類黃酮醣苷(C1, C2 and C3)。另一方面，我們也開發了以鹽水(0.1 M NaCl)萃取系統來提取土肉桂葉中三種類黃酮醣苷C1，C2和C3，我們將乾燥後的土肉桂葉在室溫下以0.1 M NaCl溶液萃取2小時，萃取液經由過濾後，分成兩部份，程序A是將以電氣透析儀脫鹽後的萃取液導入聚合離子交換樹脂HP-20進行吸附、脫附以回收C1，C2和C3，程序B是將我們過濾後的萃取液不經由電氣透析儀脫鹽直接導入聚合離子交換樹脂HP-20進行吸附、脫附以回收C1，C2和C3，上述過程中將HP-20樹脂置入於玻璃管柱中(L 31 cm × OD 3.3 cm)其樹脂填充量為36g，在脫附試驗中是以95 %乙醇作為脫附劑，在程序A中C1，C2和C3的回收率分別為 95.36 %， 92.21 %和96.39 %，而程序B的回收率分別為，94.60 %，94.72 %和97.81 %，以毛細管電泳分析兩個流程相對含量的對比。

Cinnamomum osmophloeum Kaneh. (Lauraceae) is an indigenous tree that grows in Taiwan’s natural hart wood forest at an elevation between 400-1500 m. Traditionally, the leaves of C. osmophloeum are used in folk medicine for the treatment of inflammation, intestinal infections, astringent, diuretic and diabetic complications in Taiwan. Previously our research group have been reported the anti-inflammatory and anti-diabetic flavonoid (kaempferol glycosides) from the leaves of this species. In the present study, a capillary electrophoresis quantification method, using catechin as the internal standard was developed for the analysis of kaempferitrin (C1), kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosyl -(1-4)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (C2), and kaem pferol 3-O-β-D-apiofuranosyl-(1-2)-α-L-arabinofuranosyl-7-O-α-L-rham nopyranoside (C3). Optimal conditions found were 35 mM sodium borate buffer, pH 9.8, separation voltage 25 kV, hydrodynamic injection time 5s and temperature 25 ºC. Linearity was found over the 0.075–0.6 mg/mL concentration ranges of each compound (C1, C2 and C3) analyzed. The developed method has been applied for determination of C1, C2 and C3 in a series of C. osmophloeum leaves. On the other hand, we also developed a simple extraction process using salt water (0.1 M NaCl) for the separation of C1, C2 and C3 from C. osmophloeum leaves. The air-dried powder of C. osmophloeum leaves was extracted for 2 h with 0.1 M NaCl under stirring at room temperature. The extract was filtered and separated into two parts. In the first part the NaCl was removed using electro dialysis and subsequently introduced into a macroporous adsorption resin, where as the second part directly (without NaCl remove) introduced to adsorption resin for recovering the C1, C2 and C3. The adsorption was performed on Diaion HP-20 resin packed in a glass column (L 31 cm × OD 3.3 cm, with 36 g resin), and desorption was carried out using 95% ethanol. Through the process, in the first part the recoveries of C1, C2, and C3 were 95.36%, 92.21%, and 96.39%; whereas the same in the second part were 94.60%, 94.72%, and 97.81%, respectively. The content of C1, C2, and C3 in the above both parts were quantitatively determined using capillary electrophoresis and found the results was comparable.

目錄
書名頁
博碩士論文授權書
論文口試委員審定書
中文摘要 I
Abstract III
致謝 V
目錄 VII
圖目錄 XI
表目錄 XIII
一、實驗目的 1
二、文獻回顧 2
2-1 土肉桂簡介 2
2-1-1 土肉桂簡介及分類 2
2-1-2 土肉桂地理分布位置 2
2-1-3 土肉桂植物形態特徵 2
2-1-4 土肉桂精油成分簡介 3
2-1-5 土肉桂葉精油之應用 4
2-2 類黃酮簡介 9
2-2-1 類黃酮結構與衍生物 9
2-2-2 類黃酮與食物的關聯 10
2-2-3 類黃酮物質之吸收代謝 10
2-2-4 類黃酮之生理功能 11
2-3 毛細管電泳之應用 15
2-3-1毛細管電泳簡介 15
2-3-2 毛細管電泳之各種分離模式 15
2-3-3 毛細管電泳對於蛋白質、胜肽之應用 17
2-3-4 毛細管電泳對於醣類之應用 17
2-3-5 毛細管電泳對於生物鹼、酚酸類化合物之應用 18
2-3-6 毛細管電泳對於維生素、有機酸之應用 18
三、土肉桂葉中類黃酮醣苷之毛細管電泳內標法定量分析 19
3-1實驗材料與器材 21
3-1-1 藥材來源 21
3-1-2 分析常用溶劑與藥品 21
3-1-3 實驗設備 21
3-2 藥品配製 22
3-2-1土肉桂葉中類黃酮醣苷標準品濃度配製 22
3-2-2 緩衝溶液配製 22
3-3 實驗方法 23
3-3-1 毛細管電泳分析條件 23
3-3-2 初始毛細管活化方法 23
3-4 結果與討論 24
3-4-1 確認兒茶素(Catechin)作為內標準品之適用性 24
3-4-2 使用兒茶素為內標準品製作標準曲線 28
四、土肉桂葉中類黃酮醣苷之聚合離子交換樹脂回收程序 35
4-1實驗材料與器材 37
4-1-1 藥材來源 37
4-1-2 層析使用溶劑 37
4-1-3 聚合離子交換樹脂 37
4-1-3 實驗設備 37
4-2 實驗方法 39
4-2-1 土肉桂葉中類黃酮醣苷之鹽水萃取 39
4-2-2 聚合離子交換樹脂之純化、回收製程A 40
4-2-3 聚合離子交換樹脂之純化、回收製程B 41
4-3 結果討論 42
4-3-1 土肉桂葉類黃酮醣苷化合物之鹽水萃取 42
4-3-2 類黃酮醣苷之聚合離子交換樹脂純化、回收程序A 45
4-3-3 類黃酮醣苷之聚合離子交換樹脂純化、回收程序B 52
五、結論與未來展望 59
六、參考文獻 61
簡歷 66

圖目錄
圖1、台灣原生土肉桂葉子和花芽(a)葉片三出脈近葉緣(b)花芽 5
圖2、土肉桂主要成分之結構 7
圖3、類黃酮基本結構 12
圖4、類黃酮衍生物結構 13
圖5、兒茶素0.8 mg/mL之毛細管電泳層析圖 25
圖6、土肉桂葉鹽水萃取物之毛細管電泳層析圖 26
圖7、土肉桂葉鹽水萃取物與兒茶素(Catechin)等量混合之毛細管電泳層析圖 27
圖8、C1 添加兒茶素之毛細管電泳分析圖 29
圖9、C2 添加兒茶素之毛細管電泳分析圖 30
圖10、C3添加兒茶素之毛細管電泳分析圖 31
圖11、kaempferitrin之標準曲線圖 32
圖12、kaempferol 3-

王振瀾，「土肉桂造林之精油收率與成分分析」，林業試驗所研究報告季刊，第二卷，第129-144頁(1987)。

王振瀾、尹華文，「栽培地區及生長季節對土肉桂葉精油含量成分之影響」，林業試驗所報告季刊第六卷，第三期，第313-328頁(1991)。

吳佳娟，「不同種類之類黃酮對於人類周邊血液淋巴球細胞激素表現之影響」，碩士論文，靜宜大學食品營養研究所，台中(2003)。

吳立軍，中藥化學，科技圖書出版(2006)。

李英信，「以毛細管區帶電泳法分析食品中之單糖、雙糖以及醣醇」，碩士論文，國立台灣大學食品科技研究所，台北(2002)。

李嘉益，「彩色濾光片再生製程強鹼染料廢水之電解-電透析處理以去除廢水中之KOH，並同時合成KOH與NaOCl」，碩士論文，國立中央大學化學工程與材料工程研究所，桃園(2006)。

林秉炤，「電透析法回收鋼鐵酸洗沸水中有價金屬」，碩士論文，國立成功大學環境工程系，台南(1987)。
林讚標，土肉桂專論，林業叢刊第38號，臺北(1992)。

胡大維、林耀堂、何政坤，「台灣土肉桂葉部精油化學成分之天然變異」，台灣省林業試驗所試驗報告，No. 78，臺北(1985)。

陳品方，「台灣杉與土肉桂精油及其成分之生物活性」，碩士論文，國立台灣大學森林學研究所，臺北(2000)。

陳俊斌，「台灣原生種土肉桂葉中類黃酮糖苷萃取分離純化與分析」，碩士論文，朝陽科技大學應用化學系，台中(2007)。

張上鎮，「林業復甦的新契機：林木天然藥用成分之開發與應用」，台灣林業，第二十八卷，第24-28頁(2002)。

張瑋麟，「台灣土肉桂中肉桂醛與乙酸肉桂酯之分析方法與萃取程序開發探討」，碩士論文，大葉大學食品工程學系碩士班，彰化(2003)。

黃玄舜，「黑殭菌素分離純化與毛細管電泳分析方法之探討」，碩士論文，國立東華大學生物技術研究所，花蓮(2002)。



傅明棟，「類黃酮素以液相層析與毛細管電泳之定量分析及取代基影響機制之研究」，碩士論文，靜宜大學應用化學研究所，台中(2003)。

潘萬德，「梅醃漬液利用電透析膜法去鹽之研究」，碩士論文，國立台灣大學食品科技系，臺北(1985)。

蔡旻都，「蔬果中類黃酮之抗氧化作用與生物活性」，碩士論文，國立中正大學化學所，嘉義(2005)。

顏焜熒，「台灣產植物藥材之成分研究」，中華藥學雜誌，第四十二卷，第1-9頁，(1990)。

Colles, S. M., Maxson, J.M., Carlson, S.G., Chisolm, G.M.,“Oxidized LDL induced injury and apoptpsis in atherosxlerosis. Potential roles for oxysterols”. Trends Cardiovasc Med, Vol . 113, pp.131-138 (2001).

Chua, M. T., Tung, Y. T., Chang, S. T., “Antioxidant activities of ethanolic extracts from the twigs of Cinnamomum osmophloeum”. Biroesource Technology , Vol . 99, pp. 1918-1925 (2008).

Fang, S. H., Rao, Y. K., Tzeng, Y. M. “Inhibitory effects of flavonol glycosides from Cinnamomum osmophloeum on inflammatory mediators in LPS/IFN-c-activated murine macrophages.” Bioorganic Medicinal Chemistry , Vol . 13, No.7, pp. 2381–2388 (2005).

Gryglewski, R.J., Korbut, R., Robak, J., Swies, J., “On the mechanism of antithrombotic action of flavonoids”. Biochem. Pharmacol, Vol . 36,
pp. 317-322 (1987).

“Gilbert, D.L., “Fifty years of radical ideas”. Ann NY Acad Sci,Vol. 899, pp.1-14 (2000).


Hertog, M.G., Feskens, E.J., Hollman, P.C., Katan, M.B., Kromhout, D., “Dietary flavonoids and cancer risk in the Zutphen Elderly Study.” Nutr. Cancer, Vol.22 , pp.175-184 (1994).

Hjerten, S.,“Free zone electrophoresis. Chromatogr.” Rev , Vol. 9 , pp.122-219 (1967).

Koh, W.S., Yoon, S.Y., Kwon, B.M., Jeong, T.C., Nam, K.S., Ham, M.Y., “Cinnamaldehyde inhibits lymphocyte proliferation and modulates T-cell differentiation.” Journal of Immunopharmacology, Vol. 20 , pp .643-660 (1998).
Kris-Etherton, P.M., Hecker, K.D., Bonanome, A., Coval, S.M., Binkoski, A.E., Hilpert, K.F., Griel, A.E., & Etherton, T.D., “Bioactive compounds infoods: their role in the prevention of cardiovascular disease and cancer.”Am. J. Med,Vol.113, pp. 71S-88S (2002).

Sousa., “Hypoglycemic Effect and Antioxidant Potential of kaempferol-3,7-O-(α)-dirhamnoside from Bauhinia forficate Leaves” J.Nat.Prod, Vol.67, pp.829-832（2004）.

Sesso, H.D., Gaziano, J.M., Liu, S., & Buring, J. E., “Flavonoidintake and the risk of cardiovascular disease in women.” Am. J. Clin. Nutr, Vol.77, pp.1400-1408 (2003).

Yoshihito., “Flavonoid or flavonoid glycosides as stimulators for collagen IV and laminin 5 formation, antiaging agents, and skin cosmetics.” Kokai Tokkyo Koho, pp .17 (2007).