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本研究擬探討單胞藻Chlorella pyrenoidosa 修補酵素切除受紫外光損傷 DNA之方式與其特性,以瞭解植物如何因應紫外光照射所產生的傷害。由本 實驗室所建立的體外DNA切割試驗顯示,單胞藻萃取液可切割紫外光照射 之噬菌體φx174 RFI DNA使其由密閉型轉成開放型;而由32p- dATP之插 入可表示DNA修復複製之進行。在修復合成試驗方面,我們利用限制■將 φx174 RFI DNA成直線型,以洋菜凝膠電泳及自動放射顯影法偵測專一性 修復合成中放射性標記物質的插入量。我們證實修復合成隨紫外光劑量增 加呈線性比例關係;而且修復反應絕對需要萃取液蛋白的存在;另外, ATP及ATP再造系統對修復反應進行是必需的;再者適當濃度之鎂離子是修 復反應中重要的輔因子。利用一中間有相鄰兩個胸腺嘧啶的27 mer雙股 DNA,以紫外光照射後與單胞藻萃取液反應,先以凝膠阻滯試驗證實萃取 液中含有與胸腺雙體形成具相依性的結合蛋白;最後在切割試驗中發現17 merDNA之切割產物,因此證實藻類修復機制之DNA 3'端切割位置是在嘧啶 雙體3' 端相接之第3磷酸雙酯鍵上.但DNA 5'端切割位置則沒有發現。以 上結果為直接證據顯示藻類確實具有切除紫外光損傷DNA並加以修復的機 制。
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