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北美響尾蛇粗毒經由DEAE-Sephadex A-50及Sephadex G-50 層析柱分離後，可得純的
北美響尾蛇毒素複合體。再經由SP-Sephadex C-25離子層析柱，可將複合體分離成次
單元A 與 B。
北美響尾蛇毒素複合體及其次單元A 與B ，各有16、4 及12個酪氨酸基。以光譜滴定
法分析酪氨酸基的狀態，發現複合體及次單元A 與B ，各有3、1和5 個酪氨酸基暴露
在水溶液中。
為了進一步了解酪氨酸基在北美響尾蛇毒素複合體及次單元B 的功能上所扮演的角色
，利用四硝基甲烷在溫和的條件，將蛋白質的酪氨酸基進行硝基化。當北美響尾蛇毒
素複合體最暴露在水溶液中的兩個酪氨酸基被硝基化時，其磷脂 A 活性幾乎不受影
響。而當第三個暴露於水溶液中的酪氨酸基被硝基化時，其磷脂 A 活性有顯著的下
降。當暴露於水溶液中的三個酪氨酸基完全被硝基化後，其磷脂 A 活性幾乎完全喪
失。而被硝基化後的北美響尾蛇毒素複合體, 其鍵前神經毒性則隨硝基化程度的增加
而遞減。當暴露於水溶液的三個酪氨酸基完全被硝基化後, 其毒性也完全喪失了。
經由四硝基甲烷修飾後的北美響尾蛇毒素次單元 B，其磷脂 A 活性與其鍵前神經毒
性，均隨硝基化程度增加而遞減。
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