臺灣博碩士論文加值系統

由於在低溫狀態能抑制生物體的生理變化，甚至在液氮溫度下，更能長期保存植物。本試驗以不同抗凍劑甘油濃度（無、0.2M、0.6M及1M）對種原竹柏進行不同降溫速率（-4℃/min、-10℃/min、-20℃/min、-30℃/min、-35℃/min、-40℃/min及-50℃/min）保存處理，探討其在超低溫冷凍過程中之最佳化處理程 序的生物多樣性種原超低溫保存技術。
種原竹柏進行超低溫冷凍保存後，經TTC檢測，結果顯示當降溫速率-30℃/min、抗凍劑 1M的條件具有較佳存活率74％；最低的為降溫速率-4℃/min 、抗凍劑0.2M為50％。本研究再將活與死種子藉由石蠟包埋切片法後，於光學顯微鏡下觀察，可發現死細胞比活細胞的澱粉粒明顯減少及細胞壁破損；而活細胞比原始細胞澱粉粒來得緊密。

This research set up a precision and high speed temperature controlled biological cryofreezer. The germplasm preservation technique for biodiversity was developed through the analysis of TTC viability tests and observation of ultrastructural changes in cells brought about by low temperatures. This study used the seeds of Nageia Nagi as an example to find the optimal protocol of the freezing process.
The experiments were designed to determine the optimum freeze/thaw cycle for cryopreservation of Nageia Nagi and the optimum cryoprotectant agent (CPA) for the seeds of Nageia Nagi. The viability was analyzed by TTC viability tests after exposure to four concentrations of CPA (glycerol) treatments (0M, 0.2M,0.6M and 1M) and seven cooling rates（-4℃/min、-10℃/min、-20℃/min、-30℃/min、-35℃/min、-40℃/min and -50℃/min）while the thawing rate was kept constant as 20℃/ min.
The optimum freeze/thaw cycle for cryopreservation of the seeds of Nageia Nagi was the cooling rate of -30%℃/min and CPA of 1M and got the viability of 74%. The worst cycle was the cooling rate of -4%℃/min and CPA of 0M and got the viability of 50%. Through the observation of ultrastructural changes in cells brought about by low temperatures, the results reveal that the cell textures of died seeds were damaged.

目 錄
摘 要 i
ABSTRACT ii
誌 謝 iii
目 錄 iv
表目錄 v
圖目錄 vi
第一章 前言 1
第二章 前人研究 3
2.1 低溫生物學的定義及其研究範圍 3
2.2 研究簡史 5
2.3 生物多樣性 6
2.4 生物多樣性的保護 7
2.5低溫保存之常用抗凍劑 8
2.6 冷卻速率 9
2.7 種子之TTC活力檢定 10
第三章 研究方法與使用儀器 11
3.1 抗凍劑濃度之調配 11
3.2 TTC活力檢測法 13
3.3 試驗材料方法與設備 13
3.4 試驗流程與溫控圖 22
第四章 試驗結果與討論 37
4.1 種子之TTC活力檢測 37
4.2 種子之石蠟包埋切片 46
4.3 降溫速率與抗凍劑各種濃度關係分析 50
第五章 結論 55
參考文獻 56

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