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水稻白葉枯病病菌(Xanthomonas oryzae)對rifampicin敏感與具抗性的RNA 聚合梅以 下列方法純化出,以比較其在結構上與性質上的異同。純化步驟如下: 收集菌體,以超音波震碎器打破細胞,用PEG 沈澱,用高鹽將酵素溶離,上層液經 DEAE-cell-ulose, Bio-gel A 1.5m, DNA-cellulose column ,色析,得到純化倍數 分別為273 倍與250 倍的具抗性與敏感型的酵素。 純化出的酵素,經SDS gel electrophoresis 分析,敏感型的酵素有β(β') ,α, σ三條蛋白帶,具抗性的酵素在相檔於σ的部位幾乎消失,前者β(β'):α:σ 的摩 爾比值為1:1:0.4 而後者為1:1:0.08。 二酵素的性質比較:兩酵素合成RNA 都需要ATP、CTP、GTP、Mg++、DNA模版,Mn+2可 取代Mg+2。加熱變性的DNA 不適合做模版。Hg+2, Hepar in, Ethedium bromide, Congored, ActinomycinD對二酵素皆有抑制。1.77μg/ml的rifampicin對敏感型的酵 素有70%的抑制,對具抗性的酵素則只有19%的抑制。50μg/ml的Streptouaricin對 敏感型有85%的抑制,對變異株僅21%的抑制。反應溫度,兩者皆以28∼37℃為宜。
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