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研究生:陳啟祥
研究生(外文):Chen, Qi-Xiang
論文名稱:微生物所分泌臨床分析用酵素膽固醇氧化之研究
論文名稱(外文):Studies on a clinical enzyme, cholesterol oxidase from microorganisms
指導教授:劉文雄劉文雄引用關係
指導教授(外文):Liu, Wen-Xiong
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:農業化學研究所
學門:農業科學學門
學類:農業化學類
論文種類:學術論文
畢業學年度:68
語文別:中文
論文頁數:83
中文關鍵詞:微生物臨床分析用酵素膽固醇氧化農業化學
外文關鍵詞:AGRICULTURECHEMISTRY
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由臺灣各地土壤試樣分離得到160 株膽固醇利用菌。經篩選試驗後,發現其中編號
為NTU-B-7-1 之菌株能夠利用膽固醇為唯一的碳源而生產相當量的菌體外膽固醇氧
化。此一菌株經菌學性質之鑑定後,認為屬於Arthrobacter之一新種,而命名為
Arthrobacter cholesterolica 。
膽固醇氧化生產之最適條件為(1)培養基組成:Cholesterol 2.0﹪ ; Yeast
extract 0.4﹪ ; NaNO0.2﹪ ; KHPO0.1﹪;KCl 0.05﹪;MgSO、7HO
0.05﹪;pH 7.2。(2)培養條件:通氣量1 v/v/m;攪拌速率300 rpm;培養溫度
30℃;接種量15﹪。在上述條件下,經培養72小時後,每毫升的培養液含有0.4 單
位的酵素活性。本菌株所分泌之膽固醇氧化係屬於一種誘導酵素。
培養液經連續離心後,經硫酸銨鹽析、Sephadex G-75 及Sephadex G-200管柱色層
分析等純化處理後,可獲得比活性高11倍及回收率25﹪之部份純化酵素。本酵素之
理、化學性質為(1)最適pH 7.5。(2)最適溫度55℃。(3)pH安定範圍為pH
5.0∼10.0 。(4)在60℃以下,具有熱安定性。(5)陰離子表面活性劑對酵素
活性有抑制作用。非離子性表面活性劑Triton X-100在0.05﹪v/v 濃度以下,對酵
素活性有活化作用。(6)重金屬離子Cu﹢、Hg﹢、Ag﹢等能夠顯著抑制酵素
活性(7)金屬結合劑EDTA及KCN 對酵素活性幾無影響。(8)蛋白質修飾劑DIFP
,可以完全地抑制酵素活性。顯示本酵素之活性中心與Serine殘基有關。由培養系
回收之膽固醇氧化物經使用薄層分析;氣-液相色層分析;紫外線、紅外線光譜分
析及融點測定與標準品比對後,鑑定為膽固醇。
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