利用CM-Sephadex 及DEAE-Cellulose管注層析法,從眼鏡蛇(Naja naja atra)毒 中分離出來之磷脂 A (Phospholipase A) ,以聚丙烯醯胺膠電泳法及免疫電泳 法證明它為單一的蛋白質。 磷脂 A 分子中只含有一個組織胺酸(Histidine)殘基,利用P-Bromophenacyl bromide 修飾時,酵素活性幾乎完全消失,但它的抗原性不受影響。鈣離子對此失 活作用具有保護效果。另外,其分子中之三個色胺酸(Tryptophan)殘基以HNB- bromide 修飾後,酵素活性並沒有顯著的降低,而且與抗體反應的能力仍然保持完 整。從這些結果得知,磷脂 A 分子中唯一的組織胺酸殘基可能為其酵素活性基, 但它與色胺酸殘基一樣,均與抗原決定基無密切的關係。 以磷脂 A 免疫家兔得到的抗血清,利用硫胺分劃法及親和層析法(Affinity Chromatography)精製出來的純化抗體,以木瓜 (papuin)消化後,利用磷脂 A -Sepharose管柱做親和層析以及膠過濾,可分離出Fab 單價抗體。這些抗體製品 都可以完全抑制磷脂 A 之活性,但雙價抗體之抑制作用比單價抗體較強。 測定單價抗體Fab 與磷脂 A 反應所形成之可溶性複合物的分子量,以及分析磷脂 A 與IgG 定量沈澱反應的結果,得知磷脂 A 分子中具有三個抗原決定基。 #2811868 #2811868
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