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利用Kohler及Milstein的融合瘤技術,將經過大腸癌細胞株COLO205免疫過的 BALB/C小白鼠的脾臟細胞與NS-1細胞以PEG融合,經過多次篩選(scr- eening)及單株選擇(cloning ),挑選12.1∼12.12等12個融合瘤,其 可產生抗體對大腸癌細胞株COLO205抗原,但不能對抗正常纖變細胞抗原。以 醏素免疫分析法(enzyme immunoassay, EIA )得知MAb12.8,MAb12. 9為IgG3,其餘單源抗體均為IgM。選取12.3,12.9,12.10, 12.11,12.12等5種融合瘤,打入曾注射過pristane的BALB/C小白 鼠腹腔繁殖,腹水中單源抗體的效價(titers)在10∼10之間,再以prote- in A-Sepharose 4 B affinity column或Sephacryl S-300 column純化腹水中的抗體 。 利用放射免疫分析法(radio immunoassay, RIA)測量抗體對腫瘤細胞,胚胎細胞或 正常細胞的特異性(specificity ),依各種抗體對各種細胞結合強弱的不同,可將 之分為四類。第一類12.1∼12,7融合瘤所產生抗體。對大腸癌細胞株COL O205,COLO201有強烈結合,對SW1116,LS174T有中度結合 。第二類12.8,12.9融合瘤所產生抗體,對大腸細胞株COLO205,C OLO201有強烈結合,對SW1116,WiDr有中度結合。第三類12.1 0融合瘤所產生抗體,對大腸癌細胞株COLO205,COLO201,LS17 4T有強烈結合,對SW1116,WiDr,SW480及食道癌細胞株CE69 T/VGH有中結合,利用酵素免疫分析法得知其所對抗的抗原為CEA。第四類1 2.11,12.12融合瘤所產生抗體,對大腸癌細胞株COLO205,COL O201,SW1116,LS174T,SKCO-1,WiDr,SW480, 子宮頸癌細胞株CL7T/VGH,食道癌細胞株CE48T/VGH,肺癌細胞株 NCI-Hut125,膀胱癌癌細胞株TSGH8301有強烈結合反應。 以大腸癌細胞株的細胞膜抗原萃取液(membrane extract),經SDS-PSGE, Western blot 將蛋白質移轉之後,在nitrocellulose paper 上以酵素免疫法測知A g12.11,Ag12.12在還原情況為分子量200K daltons 的蛋白質或醣 蛋白。 利用競爭抑制法測知MAb12.9,MAb12.11,MAb12.12不同。 進一步以afforadiography 分析,初步獲得4種分子量不同的物質。 將繼續從事這些單源抗體所對抗之抗原性質及其在各種組織分佈情形的研究,以評估 這些單源抗體對大腸癌在臨床檢查及診斷的可行性。
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