今日遺傳工程技術的突飛猛進,可說完全歸功於核酸內切限制的發現與應用。鑑於 以往所發現的核酸限制大都由好氣性菌而來,厭氧菌鮮有人研究,因此本試驗乃以 厭氧菌酸梭菌為材料,探究其有無限制系統,並據以分離核酸限制及研究其理化 性質,以提供遺傳工程研究上的使用及參考。 本實驗自酸梭菌,以酸纖維素及肝素-洋菜膠親和層析純化出一種核酸內切限制 Cac I。經由洋菜膠電泳分析,比較DNA的限制圖型,證實為核酸限制Sau 96 I的同形異質。其對DNA的鑑識核甘酸序列為5’-G-G-N-C-3’ 3’-G-G-N-C-5’ 。對 x174RF DNA有二個切割位置。 經純化至均質的Cac I,其次單元分量為32,500,在溶液中似以四倍體存 在分子量為148,000。Cac I的切割反應於鹼性條件下有相當高的活性, 最適酸鹼度為7.5-9.5。最適溫度於PH7.5的Tris緩衝液中為47℃切割反 應需鎂離子當輔因子,其適的鎂離子濃度為5mM,高濃度的鎂離子反有抑制作用。 反應並不一定需鹽,但適量的鹽可增加其反應速,最適鹽濃度為10-50mM,高 鹽反對其活性有抑制作用。Cac I在鹼性條件下較為安定,於酸性條件下活性幾 乎全喪失。對溫度安定性,於45℃以下的溫度相當安定,但在60℃以上則活性喪 失迨盡。
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