本文擬利用大腸桿菌來合成Ｂ型肝炎病毒表面抗原蛋白研究（ＨＢｓＡｇ）。由於一
來的基因大腸桿菌大中表現的蛋白，容易被快速的分解。因此吾人必須建立一些俱有
分泌能力的載體（Vector），盼其能將在大腸桿菌中合成的Ｂ型肝炎病毒表面抗原蛋
白分泌至大腸桿菌細胞質外，以克服其蛋白質穩定性的問題。
吾人利用來自枯草桿菌（Bacillur liceniformis ）染色體ＤＮＡ而俱有分泌訊號（
Secretory Signal）的盤尼西林基因（Pen P ）。將Ｂ型肝炎表面抗原基因嵌入此
基因中，使其表現一帶有部分盤尼西林 和Ｂ型肝炎病毒表面抗原蛋白的融蛋白（f-
used protein）。希望其分泌訊能能帶動此融白蛋白至大腸桿菌的細胞壁間隙（per-
iplasmic fraction ）或培養基中。
利用放射性免疫測定法（ＲＩＡ），放射性免疫沈澱法（radioimmunoprecipitaion
），以及直接菌落免疫測定法（direct colony immunoter ）一大腸桿菌外膜脂蛋白
起動子（E. coliouter membrane lipoprotein promoter ; lpp），希望加強此融合
蛋白的表現。
盤尼西林基因經加上ｌｐｐ起動子之後，其基因的表現可增加百倍以上。然而將Ｂ
型肝炎病毒表面抗原基因，但皆與ｌｐｐ起動子反方向的質體，及一個接兩段表面抗
原基因，但彼此方向相反的質體。可能是表面抗原基因與ｌｐｐ起動子同方向接法的
質體，會帶動大量融合蛋白的合成，而此疏水性（hydrophobic ）強的融合蛋白會造
成細胞的死亡。
鑑於上述可能發生的問題，吾人將表面抗原基因經過適當修剪去掉此段疏水性強的片
段後，再重新嵌入盤尼西林 基因。實驗結果可獲得一表面抗原基因與ｌｐｐ起動子
同方向的質體。攜帶此質體之大腸桿菌經抽取其細胞壁間隙蛋白做ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ
分析，可發現一分子量約２８，０００道爾頓的蛋白，與我們預測的部份盤尼西林
與部份表面抗原融合蛋白分子量相近。
另外由於完整的表面抗原及其結構基因前區（pre-Sregion ）的多胜（polypetide
）對表面抗原蛋白的免疫性很重要，所以我們仍希望在大腸菌中表現完整的表面抗原
蛋白。因此吾人乃將另一起動子Ｌａｃ起動子，接於同一質體上以獲得攜帶有兩個起
動子的質體，希望此Ｌａｃ起動子能控制ｌｐｐ起動子或是調節其轉錄（transcrip-
tion）的速率。
由於目前所使用的測定Ｂ型肝炎病毒表面抗原中所採用的抗體試劑，皆是對抗血清的
２２ｎｍ表面抗原顆粒。而由大腸桿菌所表現的部份盤尼西林與表面抗原融合蛋白
可能無法利用此種抗體偵測。為了克服上述的問題及探討上述融合蛋白之免疫性，吾
人直接將俱有表現此融合蛋白能力之大腸桿菌抽出液接種於免子，並測定其免疫性。
目前實驗結果發現接種後比接種前其抗表面抗原之抗體力價有昇高的趨向，此實驗有
待更進一步的證實。
#1022012p
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