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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:張長泉
研究生(外文):ZHANG, CHANG-GUAN
論文名稱:甘藷(Ipomoeabatatas(linn.)poir.)澱粉磷解及其抑制因子之研究
論文名稱(外文):Starch phosphorylase and its inhibitor in sweet potato (ipomoea batatas (linn.) poir.)
指導教授:蘇仲卿蘇仲卿引用關係呂勝春
指導教授(外文):SU, ZHONG-GINGLU, SHENG-CHUN
學位類別:博士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:農業化學研究所
學門:農業科學學門
學類:農業化學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1984
畢業學年度:74
語文別:中文
中文關鍵詞:甘藷澱粉磷解酵素抑制因子
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磷解分別由成熟的甘藷塊根和收穫後儲藏(室溫)二個月的塊根中抽取。由成熟甘
藷中所純化到之酵素平均分子量205000,但由儲藏的甘藷中所純化到的則為1
59000。雖然分子量不同,但以成熟甘藷中之酵素免疫兔子所產生之抗體,與二
種不同生理時期所純化到之酵素做雙向免疫擴散分析(Ouchterlony double diffusi
on),其沈澱線卻完全融合。二種不同時期之磷解在聚丙烯醯胺膠體上並非單一蛋
白質帶,而是由5至6個很接近之帶所組成(並且皆有活性),應immunoblotting之
技術及單株抗體之特性,知道這些帶具有共通之抗原決定部位。在SDS-聚丙烯醯胺膠
體上,二種不同生理期之酵素具有非常相似之型式(patterns),均由一分子量98
000之大的次單元和4個分子量由47000至57000之小的次單元所組成,
,使用胜圖和immunoblotting之技術,知道小的次單元是大的次單元之分解產物。
儲藏後之甘藷磷解可能是成熟(或發育)時期之酵素經部分水解而來,且二者在胜
肱鏈之中間位置有一或數點受到蛋白質水解之作用而產生缺口(nick),但對酵素
之分子量及活性影響不大。
雖然成熟甘藷之磷解在免疫電泳(immunoelectrophoresis )及雙向擴散分析時呈
單一沈澱線,但在等電焦集時卻無法集中成一蛋白質帶,而呈二至三個較為擴散(di
ffuse )之帶,等電點分佈在pH4.6 至4.8 及pH4.9 至5.0 之間。
磷解抑制因子首次在本實驗中發現,其分子量250000,次單元分子量510
00,故可能由5個左右之次單元所組成,等電點為pH4.62,對磷解之抑制作用屬
於非競爭型(noncompetitive),其Ki值為1.3×10mM。
應用免疫螢光顯微鏡之技術,標定出磷解及抑制因子同時出現在澱粉粒(包括粒膜
)及細胞壁上,免疫電子顯微鏡之結果則進一步肯定二者均存在於細胞壁上,而不是
膜上。磷解存在於澱粉粒上已有報告(114),但尚無人發現也存在於細胞壁上

動物之磷解有很複雜之調節機構,但至今尚未在植物磷解上發現有任何調節機制
存在。本研究中發現了它的抑制因子,且證明二者存在細胞內相同位置,暗示了植物
磷解可能存在著一尚未為人知之調節機構。
目次
第一章 緒論
第一節 澱粉磷解 之發現
第二節 植物磷解 與動物磷解 之比較
第三節 植物磷解 之特性
第四節 不支持磷解 與澱粉合成有關之實驗結果
第五節 磷解 與澱粉合成之可能關係
第六節 本實驗之緣起
第二章 實驗材料與方法
第一節 實驗材料
第二節 酵素活性分析
第三節 磷解 及其抑制因子之純化
第四節 聚丙烯醯胺膠體電泳(polyacrylamide gelectrophoresis)
第五節 等電焦集(isoelectric focusing)
第六節 抗血清之製備,雙向擴散(double diffusion)及免疫電泳
第七節 分子量之測定
第八節 胜 圖製作(peptide mapping)
第九節 胺基酸組成及N末端之胺基酸次序分析
第十節 單株抗體(monoclonal antibody)之製備
第十一節 免疫螢光顯微鏡技術(immunofluorescence microscopy)
第十二節 免疫電子顯微鏡技術(immunoelectron microscopy)
第三章 實驗結果
第一節 磷解 之純化
第二節 磷解 抑制因子之純化
第三節 磷解 及其次單元(subunit)之分子量
第四節 磷解 大、小次單元之關係
第五節 磷解 抑制因子及其次單元之分子量
第六節 等電點
第七節 胺基酸組成
第八節 影響磷解 (PreparationⅡ)活性之因子
第九節 磷解 (PreparationⅡ)之動力學(enzyme kinetics)
第十節 磷解 及抑制因子在細胞內之分佈
第四章 討論
中文摘要
英文摘要
參考文獻
誌謝
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