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研究生:陳孟良
研究生(外文):CHEN, MING-LIANG
論文名稱:人體B型肝炎病毒X基因在大腸桿菌表現之探討
論文名稱(外文):Study of hepatitis B virus X gene expression in Escherichia Coli
指導教授:羅時成羅時成引用關係
指導教授(外文):LUO, SHI-CHENG
學位類別:碩士
校院名稱:國立陽明大學
系所名稱:微生物暨免疫學研究所
學門:生命科學學門
學類:微生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1986
畢業學年度:74
語文別:中文
中文關鍵詞:B 型肝炎肝炎病毒B 型肝炎病毒基因X 基因大腸桿菌
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檢藉著基因重組技術,探討人類B 型肝炎病毒X 基因於大腸桿菌內的表現情形。我們
選擇含噬菌體P 起動子的質體POTS作為表現載體,並利用對溫度敏感突變株溶菌體的
宿主Nits857)來表現X 基因。
將一段含有大部分X 基因BamHI-Bgl ⅡDNA 片段,插入POTS質體的BamHⅠ限制使得 X
基因直接受P 起動子控制,而不是以融合基因形式存在。這個重組質體pMLX.915
1中,經過溫度轉移誘發(28℃→42℃)後,在SDS -電泳染色膠片上,並沒有
大量X 預測這表現系統的功能性,我們繼續將一段含有大部分β-半乳糖中α-
peptide 基因分M 13mp 18 Gene Ⅱ的BamHⅠ-Bgl Ⅱ DNA片段,插入pMLX,9質
體之BamH Ⅰ 限制,得到另一個重組質體pMLαX59,使得α-peptide 基因直接受
P 起動子控制;而X 13mp18Gene Ⅱ 起動子控制,以融合基因形成存在。pML α
X 59經誘發表現,得到了子量與α-peptied Gene Ⅱ-X融合蛋白質相似的產物。
藉著各種抗體血清與western PAP 技術之偵測,確定大量蛋白產物至少具有GeneⅡ-X
融合蛋白質。至於α-peptied 則尚未確定。
因的核酸弱列分析,發現距離ATG 起動密碼不遠處,存在核酸倒轉重覆現象(r-
epeat ),造成X 基因RNA 的特殊二度構造。在pMLαX 59質體中,由於M13mp1
8部分插入,使得這個倒轉覆核 酸序列與GeneⅡ起動密碼之間的距離拉長,進而增
加了現。重組質體pMLX.9⑺,它包含了一段來自Tc gene 3的倍數(213個核
酸)DNA 片段,插在pMLX.9質體的BamH Ⅰ 限制 切割處。這使得X 基因的倒轉重
覆核 酸序列與起動密碼的距離也拉長了。在溫度誘發表現後,並沒有大量X 蛋白的
產生。

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