檢藉著基因重組技術，探討人類B 型肝炎病毒X 基因於大腸桿菌內的表現情形。我們
選擇含噬菌體P 起動子的質體POTS作為表現載體，並利用對溫度敏感突變株溶菌體的
宿主Nits８５７）來表現X 基因。
將一段含有大部分X 基因BamHI-Bgl ⅡDNA 片段，插入POTS質體的BamHⅠ限制使得 X
基因直接受P 起動子控制，而不是以融合基因形式存在。這個重組質體pMLX．９１５
１中，經過溫度轉移誘發（２８℃→４２℃）後，在SDS －電泳染色膠片上，並沒有
大量X 預測這表現系統的功能性，我們繼續將一段含有大部分β－半乳糖中α－
peptide 基因分M １３mp １８ Gene Ⅱ的BamHⅠ-Bgl Ⅱ DNA片段，插入pMLX，９質
體之BamH Ⅰ 限制，得到另一個重組質體pMLαX５９，使得α－peptide 基因直接受
P 起動子控制；而X １３mp１８Gene Ⅱ 起動子控制，以融合基因形成存在。pML α
X ５９經誘發表現，得到了子量與α－peptied Gene Ⅱ－X融合蛋白質相似的產物。
藉著各種抗體血清與western PAP 技術之偵測，確定大量蛋白產物至少具有GeneⅡ-X
融合蛋白質。至於α－peptied 則尚未確定。
因的核酸弱列分析，發現距離ATG 起動密碼不遠處，存在核酸倒轉重覆現象（r-
epeat ），造成X 基因RNA 的特殊二度構造。在pMLαX ５９質體中，由於M１３mp１
８部分插入，使得這個倒轉覆核 酸序列與GeneⅡ起動密碼之間的距離拉長，進而增
加了現。重組質體pMLX．９⑺，它包含了一段來自Tc gene ３的倍數（２１３個核
酸）DNA 片段，插在pMLX．９質體的BamH Ⅰ 限制 切割處。這使得X 基因的倒轉重
覆核 酸序列與起動密碼的距離也拉長了。在溫度誘發表現後，並沒有大量X 蛋白的
產生。
|