檢藉著基因重組技術,探討人類B 型肝炎病毒X 基因於大腸桿菌內的表現情形。我們 選擇含噬菌體P 起動子的質體POTS作為表現載體,並利用對溫度敏感突變株溶菌體的 宿主Nits857)來表現X 基因。 將一段含有大部分X 基因BamHI-Bgl ⅡDNA 片段,插入POTS質體的BamHⅠ限制使得 X 基因直接受P 起動子控制,而不是以融合基因形式存在。這個重組質體pMLX.915 1中,經過溫度轉移誘發(28℃→42℃)後,在SDS -電泳染色膠片上,並沒有 大量X 預測這表現系統的功能性,我們繼續將一段含有大部分β-半乳糖中α- peptide 基因分M 13mp 18 Gene Ⅱ的BamHⅠ-Bgl Ⅱ DNA片段,插入pMLX,9質 體之BamH Ⅰ 限制,得到另一個重組質體pMLαX59,使得α-peptide 基因直接受 P 起動子控制;而X 13mp18Gene Ⅱ 起動子控制,以融合基因形成存在。pML α X 59經誘發表現,得到了子量與α-peptied Gene Ⅱ-X融合蛋白質相似的產物。 藉著各種抗體血清與western PAP 技術之偵測,確定大量蛋白產物至少具有GeneⅡ-X 融合蛋白質。至於α-peptied 則尚未確定。 因的核酸弱列分析,發現距離ATG 起動密碼不遠處,存在核酸倒轉重覆現象(r- epeat ),造成X 基因RNA 的特殊二度構造。在pMLαX 59質體中,由於M13mp1 8部分插入,使得這個倒轉覆核 酸序列與GeneⅡ起動密碼之間的距離拉長,進而增 加了現。重組質體pMLX.9⑺,它包含了一段來自Tc gene 3的倍數(213個核 酸)DNA 片段,插在pMLX.9質體的BamH Ⅰ 限制 切割處。這使得X 基因的倒轉重 覆核 酸序列與起動密碼的距離也拉長了。在溫度誘發表現後,並沒有大量X 蛋白的 產生。
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