本實驗的目的是分離大頭鰱(Hypophthalmichthys nobilis;Bighead Carp)腦下腺 性腺刺激素及次單元。 大頭鰱腦下腺粉末以40%乙醇、6%醋酸胺、ZpH 5‧1的溶液於4℃下箤取,再 以乙醇(最濃度80%)沈澱醣蛋白。所得之醣蛋白以Sephadex G—100分離,得 到三個部分,其中第二部分(BH G2)具有最強的性腺刺激素活性。 本實驗發展以HPLC分離大頭鰱性腺刺激素次單元之系統。olumn 為 Nucleo —sil 7 ρC18 之everse phase column ;溶劑系統包括溶劑 A(水:氰甲烷:三氟醋酸= 77‧5︰22‧5︰0‧07體積比)及溶劑 B(水:氰甲烷:三氟醋酸=68: 32:0‧07體積比);滌流條件為溶劑 B對溶劑 A作非腺性梯度的濃度增加,於 30分鐘時,溶劑 B達85%。BH G2在此系統中展開為五個部分,C1∼C5;其中 C1及C5為最主要部分。經過各次單元重組結合後之生物活性測定,氨基酸組成分析 及--末端部分。氨基酸順序分析,我們認為C1,C2,C3 為大頭鰱性腺刺激素的 a 次單元,C4 及C5 為β次單元。 a 次單元(C1) 之氨基酸組成中含高量的 Asp(10‧71%),Cys (9‧41 %)及 Val(9‧09%),而β%單元(C5) 則含有高量的 Glu(10‧86% ,Pro(9‧84%),Asp(10‧80%),及 Val(11‧00%)。經由 SDS -PAGE的鑑定,a 次單元的分子量為17、400 daltons,β次單元為26、00 0 daltons。
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