本研究乃利用三種不同菌屬及乾燥加工法之乾酵母粉為材料,而以Dyno Mill 、Ball Mill 及乙酸乙酯自分解等方法破碎細胞壁,並探討其最佳破碎率對萃取時間及萃取 量之影響。同時亦檢討以不同方法及萃取液,萃取細胞色素-C時,對細胞色素-C之純 化分離有何種程度之影響。另外並檢討相同菌屬間,乾燥加工及貯存時間長短,在純 化分離細胞色素-C時會造成何種影響。最後紫外光吸收光譜儀、原子吸光光譜儀、元 素自動分析儀及紅外光光譜儀等分析儀器,檢測以本研究之方法所純化分離之細胞色 素-C之純度。 結果我們認為由酵母菌體中,純化分離細胞色素-C時,在菌體選擇上應選擇新鮮且以 氐溫乾燥之酵母粉為佳。在高效率破碎細胞壁選擇上,應採用Dyno Mill ,並以0. 2∼0.3mm直徑之玻璃珠,在2500rpm 下,以每小時5∼10升流出量為操作 條件為最佳,其細胞壁膜之破碎率可達99.5%以上。在萃取時間縮短及減少變質 機率發生之選擇上,亦以採Dyno Mill 為佳,因為以Dyon Mill 破碎之酵母菌,在萃 取時間花費上只有以乙酸乙酯自分解法的1/8時間同時也較Ball Mill 破碎法結省 2/3時間。在離子交換樹脂吸附及溶離條件之選擇上,則以Amberilite CG-50弱 酸性陽離子交換樹脂(weak carboxylic acidion-exchanger )配合以20%,pH8 .0之飽和硫酸銨溶液溶離吸附於6×4之管柱上之細胞色素-C.然後以90%飽和 度之硫酸銨溶液,飽和沈澱雜質,經透析後通入2×10管柱中,以同樣過程溶離細 胞色素-C及沈澱雜質。最後經1×20管柱吸附後,以1N ,pH8.0之磷酸緩衝溶 液溶離效果最好。在結晶過程中,則以95%硫酸銨飽和度溶液在pH=9.0及少量 維他命C (Ascorbic acid )添加下,結晶還原態細胞色素 產量最好。 以本研究之條件純化分離(purificatiaon and separation)細胞色素-C,除了可以 獲得高產率210mg/kg外,更可以獲得以紫外光譜儀(U .V .)、元素分析儀( Element alanalyzer),原子吸光光譜儀(A .A .),及紅外光譜儀(I .R .) 等方法證實高純度之細胞色素 。
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