由B 型肝炎病毒感染而引起的B 型肝炎可能和肝癌的形成有相當密切的關連，為進一
步了解兩者之間的相關程度，須對B 型肝炎病毒做更深入的研究，由分析各亞型B 型
肝炎病毒的核酸序列得知B 型肝炎病毒至少有四個開放編閱區（ open reading fra-
me），即表面抗原區（S／per S region ），核抗原區（core region ），聚合區
（Pregopn ），及X 區（X region），在這四個開放編閱區中，有關核抗原區及表面
抗原區的研究已經有相當的成績，至於聚合區與X 區在HBV 病毒中是否有蛋白存在
及其生物功能仍未有完整的定論。
為探討B 型肝炎病毒X 區的生物功能，我們構築了一穿梭載體（shuttle vector），
以便能在大腸桿菌中大量複製所需質體，另一方面亦能在哺乳類動物細胞株中複製。
我們選擇pCP ２５做為基礎，因為此質體含bovine papilloma virus之基因可作為小
鼠細胞株內之複殖起點，且bovine papioooma virus的基因可以在小鼠細胞體內成為
一質體（episome ）形式存在，有助於穿梭載體基因個數的增加。為使HBV X 基因在
小鼠細胞株內得到適當的起動子以表現其基因而選擇了Moloney murine sarcoma vi-
rus的LTR （long terminal repeat），作為X 基因的起動子，因而構築了pLTR X。
另外需要一篩選標記來鑑別此穿梭載體是否順利進入寄主細胞，質體p ６９SR上含有
HBV 表面抗原基因，可以藉著小鼠metallothionein 起動子來控制此抗原基因表現，
故可利用HBsAg 做為篩選標記。在表面抗原基因片段下為Tn５的neo^r 基因片段，此
基因片段可轉譯一個酵素niomycin phosphotransferase ，此酵素能提供寄主對抗一
般aminoglycoside類的抗生素，如kanamycin 、neomycin等。在小鼠細胞株所使用的
aminoglycoside抗生素為Geneticin （G ４１８），在此neo 基因片段之後則是一段
０．８kb的SV４０小t （small t ）的轉譯終止訊號。
為進一步探討X 區與核心抗原區，甚至聚合區的關係。又構築了質體pLTRHBV ，此
質體乃一完整HBV 基因置於Moloney murine sarcoma virus的LTR 之下。由此可得到
兩個完整的X 區開於編閱結構，乃各一個表而抗原區，核抗原區及聚合區，此種排
列方式為其它實驗室或文獻報告中所未有。
在獲得這些穿梭載體後，乃需要更進一步的實驗將這些穿梭載體植入小鼠細胞內，來
觀察此穿梭載體的表現情形。
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