不同品系的旋毛蟲以前僅被認為是來自同一種的地區變種。然而,旋毛蟲(Trichine lla spiralis:Ts)能與假性旋毛蟲(Trichinella pseudospiralis:Tp)交配的證 據尚未完整顯示。直接在DNA 層次上研究兩者基因組合變異,將使我們在解決種化的 問題上獲得啟示。因此用此二寄生蟲基因組合DNA 的限制片段長短差異性(Restri citon Fragment Length Differences:RFLD ),來尋找此二寄生蟲的差異及所存分 別不同品系並解釋在寄主肌肉變性過程的獨特DNA 序列。 以標準程序抽取蟲體DNA 後,再用限制切割,用電泳法分析。在Ethidium bromide 染色及UV燈下觀察,顯示二蟲DNA 在相同限制切割下,有截然不同的片段出現。如 以Pst I切割,Ts DNA 呈現兩個主要片段為1‧6及0‧3kb;而Tp DNA則有六個主 要片段,約為4‧8,3‧6,3‧1,2‧1,1‧6及1‧3kb。若在Bam HI切 割,Ts DNA則顯示兩個主要片段,約為4‧5及1‧6kb,相對地Tp DNA僅有一個2 ‧7kb片段。用EcoR1切割Ts DNA則出現四主要明顯片段為1‧7,1‧0,0‧6 ,0‧55kb與Tp DNA的3‧0,2‧2,1‧6及1‧3kb不同。以上Ts及Tp DNA 的RFLD確認了在英國及加拿大類似的發現,並更支持它們屬於不同種。 接著以Ts DNA的0‧3kb Pst I片段複殖入在JM 103 中的質體pUC18 ,並做為 比較Ts及Tp DNA的限制片段長短多樣性(Restriction Frag—ment Length Polymo rphism:RFLP)的探針。共選出六個菌株含有Ts 0‧3kb DNA 的插入片段,同時加 以定性。以第一號菌株(命名為pTs 0‧3—1)的0‧3kb片段與在Ts DNA經Pst I 及其他限制完全或部份切割下做南氏雜聯,結果顯示此0‧3kb僅可與Ts DNA P st 1 0‧3kb部分雜聯,同時在Ts DNA中可能為前後相連序列(tandem arrays );並且在條蟲及錐蟲中亦無發現相似片段。 用定量估測的長孔雜聯法來測定Ts DNA之0‧3kb的拷貝數約為47500個,而Tp DNA亦有呈現前後相連序列的此片段約為650個拷貝數。 直接 以超螺旋核酸定序法分析pTs 0‧3—1,顯示其為富含腺嘌呤及胸腺嘌呤(A T )核酸(70%)的228個鹽基對序列。其內共有兩對直接重複序列及五對顛 倒重複序列,其中有趣的是在兩端的顛倒重複序列CTGCAGTA。經由電腦程式偵測顯示 此片段含有以t RNA 的構形,但不具一般t RNA 基因之不變區域的固定核酸(Concen sus and Conserved nucleotide bases)。 此片段的功用及生物意義仍不清楚,然而卻有與哺乳類SINE(Short In—terspersde Nucleotide Element)的序列拷貝數比例。因此用北方轉印雜聯法偵測其RNA 轉錄產 物及確定與其他pTs 0‧3菌株中Ts DNA片段或其他重複序列片段的關係,仍值得進 一步注意及研討。
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