以pBR322當載體,利用Escherichia coli選殖B. circulans β -澱粉基因,用以 研究細菌β -澱粉基因的構造、表現和分泌機制。先將B. circulans 染色體DNA 用Sau 3A 部分切割後,所以得5Kb 左右的DNA 片段,與經BamHI 切割的pBR322連接, 轉形到E. coli BNN45,構築完成B. circulans 基因庫。再利用碘液染色法於基因庫 中進行篩選,亦即在含有澱粉的LS平板染色,挑選有粉紅色環的菌株,該菌株經多次 轉移,仍然可以在含AP的LS平板穩定地分泌β-澱粉 。 經DNA-DNA 雜配證明其上4.95Kb的嵌入基因確實來自B. circulans,進一步做基因切 除拼圖,可以將嵌入基因縮小到2.25Kb的EcoRI-PstI片段,仍保有分泌β-澱粉的 生活。將E. coli 轉形株產生的澱粉與由B. circulans抽取的酵素做一比較,二者 均會水解澱粉,得到的小分子產物只有麥芽糖,而無葡萄糖。進一步在SDS-polyacry lamide膠體電泳分離蛋白質後,經活性染色,發現澱粉分子量主要在62000Dalton 左右。為了深入了解β-澱粉基因素現和分泌的調節機制,有待分析其核序列, 這一部份工作正在進行中。
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