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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:陳祖得
研究生(外文):CHEN, ZU-DE
論文名稱:小球藻原生質之誘導和接受高壓電擊之反應
論文名稱(外文):Protoplast induction in chlorella and its response to high-voltage pulse
指導教授:林良平林良平引用關係
指導教授(外文):LIN, LIANG-PING
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:農業化學研究所
學門:農業科學學門
學類:農業化學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1988
畢業學年度:76
語文別:中文
論文頁數:108
中文關鍵詞:小球藻藻類原生質電擊細胞融合細胞品種改良酵素法
外文關鍵詞:CHLORLLA
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小球藻(Chlorella )是一種單細胞的綠色藻類,在學術研究上或工業上之大量培養
均佔有相當重要的地位,而其原生質體之製備除有助於細胞學、分子生物學生化分析
等之研究外,更是細胞融合或遺傳物質導入等品種改良技術所必需.
本實驗以酵素法來誘發小球藻原生質體生成,並嚐試以電融合法進行細胞融合.結果
在五株供試小球藻株中(C.pyrenoidosa NT-11、C.ellipsoidea C-27、C-
87、C -102及C.vulgaris M 125),僅有C -87一株能以酵素誘發生成
原生質體,誘發之最佳條件為以2%(W /V )Macerozyme R-10及2%(V /V
)β-glucuronidase 兩種酵素混合使用,在以蒸餾水宜接配成之1.0M 甘露醇/
山朵糖醇(1/1)迥張溶液中,於室溫照光條件下,靜置處理細胞12小時,原生
質體生成率可達99%.細胞之前培養時間(細胞年齡)與方式(自營或混營)會影
響原生質體生成之安定性,培養二週之細胞生成之原生質體較培養4天至1週者安定
,混營培養生成者又較自營培養者安定.所生成之原生質體經螢光染色法及穿透式電
子顯微鏡觀察證明其纖維質細胞壁已完全被除去.原生質體無法於洋菜再生培養基中
再生.另外,實驗中並發現藻株C -87無法在黑暗中異營生長,其自營生長速率亦
極緩慢,經改良培養基及提供果糖為碳源後,可明顯促進其混營生長速率.
在電融合條件探討方面,用所生成之C -87藻株原生體直接進行介電泳動(diele
ctrophoresis),及電融合條件探討,結果可以順利排成鍊珠串狀達到細胞(膜)緊
密接觸之目的,其後施以瞬間高壓直流電擊,發現在使細胞膜呈可逆破壞之理論電壓
範內,不論電擊瞬間長短皆無法誘導原生質體之融合;當瞬間電壓超過理論值以上時
,原牛質體開始破裂,仍無細胞融合之現象發生.進一步改變各種物理、化學及生物
條件後,皆無法誘導細胞之電融合.小球藻原生質體此種無法電融合現象原因仍然未
知,而其電融合之真正條件則待進一步尋求.

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