木瓜輪點病毒(Papaya ringspot virus,PRV)屬植物病毒中之馬鈴薯Y群病毒(Po tyvirus ),此病毒為限制本省木瓜生產達10年以上之主要因子.由生體外轉譯作 用研究結果顯示,PRV 基因之表現方式為經由複合蛋白的裂解作用(Proteolytic pr ocessing)方式產生終產物(Yeh and Gonsalves ,1985).以不定形內含蛋白體( Amorphous inclusion protein,AIP)之抗血清行免疫沈澱反應時,除AIP 外,尚可 偵測到一112K蛋白為主要反應物.本實驗之目的,在於利用112K之抗血清反 應結果,以AIP 抗血清為探針,偵測感病刺角瓜(cucumis metuliferus )之112 K蛋白,並進一步確立此112K之純化過程,而且,經由純化之112K蛋白免疫 老鼠,利用融合瘤技術製備其單元抗體,進一步在生體內外(invitro and in viro )分析此112K蛋白表現之重要過程,並提供研究基因產物特殊功能的一個重要工 具.112K蛋白在感病之刺角瓜內接種後第四天即可偵測到,且產生之時間與 AIP 相同,在高溫下,112K累積較多.112K純化可依植物組織萃取、不同高低速 離心,配合Triton X-100的處理、電泳及濃縮過程行之.利用112K及AIP 之 抗血清分別偵測生體內外之112K蛋白.而以112K免疫老鼠,經由融合瘤細胞 培養技術生產單位抗體,在生體內兩型單元抗體皆可與112K反應,其中一型亦可 與51K AIP反應,另一型則不會與 AIP反應,但卻可與64K反應,此結果顯示, 51K及64K與112K皆有共同抗原決定基在,而在51K及64K之分子量總 和,約與112K相近,且經由前人的研究顯示,112K為扮演64K及51K A IP在蛋白裂解過程中前驅物的角色.
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