由胸腺萃取液分離出來的胜在維持免疫反應之後展及平衡上佔有極重要的地位。目 前已有多種胸腺因子純離並鑑定成功,包括Thymosin α1 ,thymosin β4 ,thym opoietin及thymulin,這些因子均具有免疫調節的功能。最近並有thmosin α1之前 軀物prothymosin α及類似物parathymosin之報導。由組織分佈研究,顯示prothymo sin α主要存於胸腺中,而parathymosin則在肝臟中含量較高,這兩種胜之生理功 能目前尚不清楚。 本論文由豬、小白鼠及大白鼠肝臟中純離parathymosin並研究其化學構造及生物性質 。 新鮮肝臟切碎後,先用沸水處理,繼以均質、離心、過濾等步驟得一精萃取液。此萃 取液經過膠質層析過濾(Sephadex G-100)及逆相高效能液態層析法(RP-HPLC )以μBondapak C18 層柱分離。純化得到的胜以胺基酸分析儀分析其組成及定量 。為鑑定純化胜之化學結構,乃利用不同之蛋白水解(trypsin 及thermolysin )將胜切成片斷,再以RP-HPLC分離生成比多鏈之類圖譜(peptide map ,各 片斷經收集後以胺基酸分析儀定量並定其組成,再以蛋白質∕胜定序儀(ABI 47 7A/120A)定序。此定序儀以Edman degradation 法順序切斷胜腱並以連線 之PTH analyzer鑑定序列。除此之外,又利用高壓電詠法(High voltage paper ele ctrophoresis)分離一些在HPLC無法分離之片斷,分析其組成及次序,然後結合這些 片斷之重疊處,而完成多鏈的胺基酸次序。純化胜之生物性質以γ-interferon ,tumor necrotic factor ,interleukin-2 receptor等方法方析(此部份係與台 北榮民總醫院合作完成)。 由不同動物肝臟分離純化的parathymosin其含量以μg∕g tissue 表達如下:小白鼠 (Balb∕c mice):44﹒43;大白鼠(S﹒V﹒rat ):48﹒68;豬:32﹒ 56。Parathymosin約含有105個胺基酸,不含有芳香族或含硫胺酸,但含有較多 之酸性胺基酸,如胺酸(Glu ),天門冬胺酸(Asp );其N-terminal 為衍生物阻 擋。中間有一段含有高量之Asp 及Glu ,尚無法完成定序。 實驗資料顯示小白鼠之parathymosin和大白鼠之parathymosin有著99%相源之結構 ,而豬之patathymosin則有數個胺基酸變異,其相源性為96%,其結果與鈖子演化 (molecular evolution )之預測相吻合。類胸腺素之生物活性及功能研究,曾利用 數種生物活測定法鑑定之。以人類臍帶血分離出之白血球測試porcine patrthymosin 之生物活性發現該胜具有增強γ-interferon之能力,同時在數種生物活性分析法 均顯示parathymosin及prothymosin α在免疫上具有相互調節及平衡之功能。另外利 用蛋白質序列檢索,發現parathymosin與cytochrome C1reductase有40﹒3%之相 源性,這些資料將有助於探討其生理功能。
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