T42G是自鹿谷養鱒場大量死亡之鱒魚(rainbow trout)鰓部(gill)所分離之 病毒,經由 RNA和蛋白質在10%SDS-PAGE分析,證明T42G屬於傳染性胰臟壞死 病毒(infectious pancreatic necrosis virus IPNV)的VR-299型.T42 G病毒雙股 RNA基因體為二段式:A段為3.8kb,B段為3.2kb.從感染T42 G病毒之CGSE-214細胞中,純化T42G病毒,經proteinase K處理後,以phen ol和chloroform萃取 RNA.將此二段純化之雙股 RNA,在50%DMSO,100℃下變 性之後,以random primer、反轉錄(reverse transcriptase)合成第一股;第二股 CDNA合成是利用RNase H在RNA-DNA hybrid的 RNA股,產生缺口後,以DNA polymera se Ⅰ取代 RNA股之方法.合成之cDNA經電泳分析,自動放射顯影後,顯示cDNA之大 子分佈是從0.3kb到2.0kb.將cDNA殖入質體後,轉形到大腸桿菌(JM109) ,以Amp/X-gal的培養基篩選白色菌,落經以 IPNV SP strain cDNA clone之A段和 B段為探針,做菌落雜交反應(colony hybridization)和南氏轉印反應(southern blot).得到一個0.3kb的T42G cDNA clone,並證實T42G cDNA clone 是屬於二段雙股 RNA基因體之B段.
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