臺灣博碩士論文加值系統

研究目的：
噬菌體Ｃｆｌｔ是一種線狀噬菌體，以柑橘潰瘍病病原菌為其寄主，感染寄主細菌後
其溶菌斑呈現混濁狀。Ｃｆｌｔ之基因體會插入寄主細菌之染色體ＮＤＡ內，形成潛
溶性生活史，這是首次在線狀噬菌體發現具有潛溶性生活史。Ｃｆｌｔ基因體插入寄
主染色體時均在固定位置，故此一ＤＮＡ重組屬於ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒ
ｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ。將各附著處予以分離，鑑定並予以核酸定序，以發現
附著處之ＤＮＡ結構特性及核酸序列之有無特殊之處是本論文研究目的之一。
另外與Ｃｆｌｔ極為相似，亦以柑橘潰瘍病病原菌為寄主的線狀噬菌體Ｃｆ是否和Ｃ
ｆｌｔ一樣其基因體具有插入寄主染色體ＤＮＡ之能力，則是本論文另一要探討問題
。另外Ｃｆｌｔ的突變種Ｃｆｌｔ其形態上類似Ｃｆ；找出此三者在基因體續構上之
不同則是本論文另一研究目的。
研究方法：
為分離及鑑定噬菌體Ｃｆｌｔ基因體插入寄主染色體ＤＮＡ時，重組發生之處的各Ｄ
ＮＡ片段，利用散彈式選殖法，找出右附著處與左附著處；再將細菌染色體ＤＮＡ以
散彈式選殖法，以右附著處ＤＮＡ片段含染色體ＤＮＡ部份為探針，用菌落雜交法找
出寄主細菌染色體上之附著處。取得各附著處之純系後，將各附著處ＤＮＡ片段轉殖
於噬菌體Ｍ１３ｍｐ１８及Ｍ１３ｍｐ１９，利用雙去氧法進行核酸定序分析。
為比較Ｃｆｌｔ，Ｃｆｌｃ及Ｃｆ三者基因體結構之不同處，則利用端點標示法，配
合限制部份剪切，由放射性顯影圖以求得各限制之切點，並據以比較三者基因體
之結構。
各附著處經核酸定序分析之後，比較其核酸序列，發現四個附著處均有一個長１
５個核甘酸序列，其序列為５′－ＴＡＴＡＣＡＴＴＡＴＧＣＧＡＡ－３′。此一核
甘酸序列富含ＡＴ。在噬菌體及寄主染色體附著處的ＤＮＡ序列中均有很多重覆性的
核酸序列 。
比較Ｃｆｌｔ，Ｃｆｌｃ及Ｃｆ之限制圖譜後，發現三者均有不同之處，但相同之
處更多，在整個基因體中只有少數幾個限制切點不同，這些不同處與三者的表現型
有何關連則待進一步研究。

誌謝
目錄
中文摘要
英文摘要
壹 前言
貳 材料與方法
一 生物材料
二 培養基
三 試藥
四 緩衝液及溶液
五 細菌及噬菌體的培養與保存
六 噬菌體RF DNA之抽取
七 質體DNA之快速抽取法
八 DNA濃度之測定
九 洋菜膠電泳分析法
十 自洋菜膠體中取出DNA的方法
十一 Nick translation
十二 Southern blotting
十三 DNA雜交分析
十四 Colony hybridization
十五 利用非放射性探針之DNA雜交分析
十六 附著處的選殖
十七 核 酸定序分析
十八 Cf,Cflt及Cflc限制 圖譜之建立
十九 照像，暗房技術及放射顯影術
參 結果
一、Cflt嵌入細菌染色體各附著處的分離及確定
二、各附著處之核 酸序列
三、共同核心之核 酸序列
四、噬菌體attp DNA之結構
五、細菌染色體attB DNA之結構
六、由DNA序列推測轉譯之胺基酸序列
一、Cf感染寄主細菌後其基因體並未嵌入寄主細菌
二、噬菌體Cflt attP的DNA序列與Cf DNA相對應的區域的DNA序列的比較
三、噬菌體Cflt,Cflc及Cf的限制 AluI,BstNI及Sau3AI圖譜之建立
肆 討論
一 噬菌體基因體嵌入寄主細菌染色體的探討
二 附著處DNA序列的探討
三 噬菌體的限制 圖譜之分析
伍 參考文獻