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研究生:胡憲明
研究生(外文):HU, XIAN-MING
論文名稱:由Trichodermapseudokoningii所生產之L-離胺酸氧化�左漪膍s
論文名稱(外文):Studies on L-lysine oxidase produced by Trichoderma pseudokoningii
指導教授:蔡英傑蔡英傑引用關係
指導教授(外文):CAI, YING-JIE
學位類別:碩士
校院名稱:國立陽明大學
系所名稱:生物化學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1989
畢業學年度:77
語文別:中文
論文頁數:103
中文關鍵詞:離胺酸氧化黴菌酵素
外文關鍵詞:TRICHODERMA-PAEUDOKONINGIIFUNGUSENZYME
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由土壤中分離出一株具有生產L﹣ 離胺酸氧化能力之黴菌,經鑑定為Trichoderma
pseudokoningii。利用麩皮固體培養方式,大約7至10天即會將大量的酵素分泌到
菌體外。酵素之精萃取液,經過硫酸胺劃分,DEAE陰離子交換層析及膠體過濾等步驟
,可達到均質化,其比活性為61﹒3 U∕㎎。此酵素之分子量大約為112,00
0,是由兩個相同的次單位(分子量約58,000)所組成。其吸收光譜在276
及466nm各有一明顯吸收峰,490nm處則出現平緩的現象,同時每莫耳之酵素有
二莫耳之FAD 。除了L﹣ 離胺酸之外,酵素對L﹣ 鳥胺酸、L﹣ 苯甲胺酸、L﹣ 精胺
酸及L﹣ 酪胺酸也有些微的反應。在pH7﹒0下,此酵素對L﹣ 離胺酸之㎞值為0﹒
027mM,對L﹣ 鳥胺酸為0﹒75mM,而L﹣ 笨甲胺酸則為25﹒5mM。酵素之等
電點為pH4﹒24,最適反應溫度為50℃,最適反應pH為7﹒0,在60℃下維持
90分鐘後,仍具有50%之殘存活性。在pH5至pH9之間,酵素相當穩定。
L﹣ 離胺酸氧化對老鼠紅血球癌細胞株IW201及IW32﹒4﹒1表現出明顯的細
胞毒性,其抑制50%生長之劑量分別為0﹒4mU∕ml及0﹒2mU∕ml。除了L﹣ 離
胺酸氧化之外,D﹣ 葡萄糖氧化,L﹣ 胺基酸氧化及L﹣ 麩胺酸氧化皆會殺
死癌細胞,而L﹣ 乳酸氧化對細胞生長初期無任何效應,但在生長末期添加則細胞
大量死亡,這些證據顯示H2O2是造成細胞毒性之主要因素。籍著添加catalase消除
H2O2之效應,當培養基中的L﹣ 離胺酸含量因酵素作用大幅降低之後,癌細胞只出
現緩慢的減少,說明離胺酸之耗盡,在此酵素之細胞毒性上並不扮演重要的角色。
將L﹣ 離胺酸氧化固定在PVC 及PP膜上,並與H2O2電極組合後,成為離胺酸酵素
電極。利用此電極測量樣品中之L﹣ 離胺酸,使用PVC 酵素膜之應答時間為30秒,
檢測範圍之0﹒05﹣1﹒6mM;而PP酵素膜之應答時間為1分鐘,檢測範圍之0﹒
05﹣2﹒0mM。固定化酵素膜在4℃保存三個月,活性不會喪失;酵素電極連續操
作三天,仍具良好之良再現性。pH5﹒0之醋酸組衝液中進行檢測,感測器對L﹣ 鳥
胺酸及L﹣ 精胺酸之應答非常低,對苯甲胺酸則只有8%之反應性(以L﹣ 離胺酸為
100%)。將此感測器實際應用於L﹣ 離胺酸醱酵液之測定,並與胺基酸分析儀法
做一比對,顯示此酵素電極可正確反映出樣品中L﹣ 離胺酸之濃度。

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