胡瓜嵌紋病毒( Cucumber mosaic virus, CMV) 屬於Tripartite植物病毒。本地的M4
8 分離株在菸草上( Nicotiana tabacum L.cv.Van-Hicks) 為無病徵潛伏感染, 而NT
9 分離株在相同寄主上, 則引起白化嵌紋病徵。本實驗室利用核酸假重組( Pseudor-
ecombination) 試驗, 已証明RNA3決定M48 與NT9 截然不同的病徵表現。為了更進一
步探討病徵決定的相關序列, 利用cDNA選殖和雙去氧核 酸定序法, 決定M48 RNA3核
酸序列。M48 RNA3的cDNA選殖分兩次進行, 首先以純化的RNA3為模板, 經Polyaden
ylation 作用後, 以Oligo (dT)為引子, 合成雙股cDNA, 然後選殖在質體pUEX1 的B-
amHI切位, 轉形作用送至E.coli MC1061。 經由南方雜配 (Southern hybridization
) 選擇一全長為1187個核 酸的重組株, 定名為MR3-21。將cDNA片段切出並轉殖到M1
3mp18,進行核 酸定序。利用既得的序列, 以DNA 合成儀合成一段20個核 酸的互補
序列做為引子, 在進行RNA3之5 '' 端cDNA合成與選殖。選擇一全長為1210個核 酸的
重組株, 定名為MR3-172。RNA3之5'' 端起點並經RNA定序決定。M48 RNA3 全長為2205
個核 酸, 包括兩段開啟讀碼架構 (Open reading frame,ORF),分別是含279 個胺基
酸的3A蛋白 (分子量為30547 daltons)以及有218 個胺基酸的鞘蛋白 (分子量為2419
5 dalt-ons)。5 ''非轉譯區、基因間區和3 '' 非轉譯區各為111、295以及302 個核
酸。比較CMV-Q、O、Y 和Fny 等系統之RNA3序列,M48和O、Y、Fny 等的同源性都在89
% 以上, 而M48 和Q 僅71% 的同源性。分別比較各部分構造, 以3A蛋白同源性最高 ,
而5''端非轉譯區之差異最大。