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研究生:劉永超
研究生(外文):LIU,YONG-CHAO
論文名稱:胸腺激素之構造與免疫化學性質之研究
指導教授:高玲君高玲君引用關係
指導教授(外文):GAO,LIN-JUN
學位類別:碩士
校院名稱:國立成功大學
系所名稱:生物化學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1990
畢業學年度:78
語文別:中文
中文關鍵詞:胸腺激素免疫化學性質聯免疫吸附法
外文關鍵詞:(PROTHYMOSIN-α(PROT-α)COMPLETE-FUREUND'S-ADJUVANT(ELLSA)(KEYHOLE-LIMPET-HEMOCYANIN(KLH
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胸腺抽取物成分之一的Prothymosin α(ProTα)具有多項免疫調節上的功能;這個具
高度保留性之 約由 110個胺基酸所組成。本論文之研究分兩部分;第一部分為鑑
定豬ProTα之一級構造。本實驗室曾經在數年前成功地從豬的胸腺組織中純化出此激
素並定出其部分胺基酸順序。未完成定序的部分主要是由於ProTα N端遭乙醯基阻絕
以及中段部分含有大量的Glu 與 Asp所致。本論文主要針對這部分尚未定序的構造進
行分析。實驗步驟包括PrkoTα 的純化與各種酵素作用後的片段之分離與定序。豬胸
腺經加熱、均質、高速離心後再以SephadexG-100 及高性能液態層析法(HPLC)等方法
純離ProTα;繼之以Trypsin,Asp-N等蛋白 加以裂解,純離出所須的各片段,並加
以蛋白質定序儀之分析,完成ProTα一級構造之鑑定。實驗結果發現豬與人類的ProT
α有高速 97%的相似性,僅有3 個胺基酸發生取代上的變異,這究竟是由於 Asn自然
的去胺基現象(Deamidation) 或是基因多現型(Polymorphism)的結果,目前尚無法定
論。
本論文另一項主題是製備對抗ProTα的多株抗體並分析其免疫化學之各種特懷。以P-
roTα 與Complete Freunnd's adjuvant 混合後注射白兔背部,並經數次再注射而得
到含有抗ProTα的血清。抗體反應及其免疫化學性質均以 聯免疫吸附法 (ELISA)測
定。目前的數據顯示ProTα是一個抗原性不高的分子,其主要的抗原區位在 N端前28
個胺基酸;特別以第15到第28個胺基酸為最強。由於傳統的ELISA 無法利用我們所培
養的抗清來偵測各種組織萃取液中的ProTα,本實驗中並試圖發展MicroELISA與Rad-
ioimmunoassay 等實驗系統來解決此一問題並進一步提高偵測上的敏感度;但這方面
仍有若干困難有待解決。正常兔子的血清於實驗後發現竟含有辨識 Keyhole Limpet
Hemocyanin(KLH) 的 IgG族群,並且在經過ProTα的種株(Iminunization) 後,有明
顯的增加;究竟是 KLH有部分構造與ProTα類似或是任何抗原均能刺激此 IgG族群的
增生則尚須進一步之肯定。

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