幾丁質(chitin)，是以β(1-4) 鍵結N-乙醯葡萄糖胺(N-Acetylglucosamine) 而成之
無分支聚合物，一般存在於節肢動物之外殼及真菌類之細胞壁上。幾丁 (chitinase
) 是一種可分解幾丁質的酵素，我們期望能藉著幾丁 基因之選殖(cloning) 提供此
種酵素之有效來源，並且探討酵素機制及基因層次之特性。
Aeromonas hydrophila CH1是自土壤中篩選得到，可分泌幾丁 的革蘭氏陰性桿菌，
我們自其中篩選出幾丁 的基因，並進行蛋白質及基因層次之探討。本篇論文主要內
容包括三大部分：第一部分為以大腸桿菌MC1061為宿主，質体pBR322為載体，構築A
.hydrophila CH1 的機因庫。以膠狀幾丁質為受質，大腸桿菌JA221 為宿主，自基因
庫中篩選到具有幾丁 活性的基因。將選殖到的幾丁 基因進行次選殖，縮短插入基
因長度至 4.5Kb，並作限制圖譜解析。最後再以南氏吸漬法(Southern blotting) 來
証實選殖到的幾丁 確實源自於A.hydrophila CH1。第二部分為蛋白質層次之分析；
將A.hydrophila CH1及含幾丁 基因之大腸桿菌的細胞外粗萃取酵素，以親和性吸附
法(affinity adsorption) 進行幾丁 之純化，並以SDS-PAGF分析，顯示所選殖到之
幾丁 之活性，發現其活性相當，每毫克的蛋白質中皆含15∼20單位的幾丁 。在有
關幾丁 調節機制之研究，幾丁 表現可受到碳源之影響，由A.hydrophila CH1及含
幾丁 基因之大腸桿菌而來之幾丁 皆可被幾丁質誘發，且可被葡萄糖強烈抑制。第
三部分為利用Henikoff所發展的單向刪除法，將4.5Kb 的幾丁 基因分解成23個連續
且重疊之DNA 片段，再利用雙去氧鏈終結法得到完整的幾丁 基因的DNA 序列。
由上述實驗指出，幾丁 基因應屬於一種異化敏感基因(catabolite senstive genes
) 在其上游應有調節基因存在，並且其調節訊號可被大腸桿菌認知。由DNA 序列分析
，我們可在其5'- 近旁基因區域，找到 CRP鍵結處，-10 區域及-35 區域之保留序列
，並且得知其開放釋讀架(open reading frame)約為 1.9kb。