臺灣博碩士論文加值系統

人類乳頭狀瘤病毒（HPV ），可引致人生殖器的良性表皮增殖疾患－尖疣，癌前期病
理變化－波文氏丘疹及惡性增殖疾患－子宮頸癌。由於迄今無法由體外培養此病毒。
所以，以本位去氧核醣核酸（DNA ），探討生殖器疣及生殖器波文氏症的 HPV DNA亞
型，分佈及位置，以了解 HPV亞型及分佈對表皮良性增殖與惡性增殖的關連，並由
HPVDNA存在細胞的位置，對其生命週期有所了解；以HPV16DNA在體化轉化人類角質細
胞成細胞株，決定 HPV的生物機能，並以此細胞株為模式細胞探討病毒DNA 、RNA 細
胞株、生長特性、細胞生長需求，並做染色體分析及角質之分析，以對 HPV16在致癌
機轉中的immortalization 所扮演角色有所了解。
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本位 DNA雜化法是nick translation法，將Ｈ標示在HPV6，-11 ，-16 ，-18DNA上，
經變性成單股 DNA後，與經RNAase處理並變性的病變組織冷凍切片做雜化，清洗後，
以NTB-2 覆被，感光 1個月後，沖片，用Giemsa液染色，再在顯微鏡下同時觀察銀粒
之有無及病理變化。
人類角質細胞株的設定，是以pdMMTneo-hpv16 head to tail dimer 對培養於不含胎
牛血清之培養液（MCDB151 添加胰島素、霍亂毒素、表皮生長素、內皮生長素、羥基
可體松、運鐵素、維他命A 酸及牛腦下垂體萃取物）之正常32P 標示的 HPV16--stIA
及 B片段為探子探討以phenol/chloroform 萃取之細胞株 DNA；以Northerm法探討以
guanidinium isothiocyanate萃取之細胞株 RNA。生長特性為觀察其形態，細胞群落
形成及細胞種植密度。生長需求為觀察並計算細胞株減去各種生長素時之生長情形。
染色體分析是以colcenid將染色體停在 metaphase，再以KCl 低長溶液打破細胞，再
染色後觀察染色體。角質分析做SDS-PAGE電泳，及依O''FARRELL 之法做二度空間電泳
，再用染色及用單株抗角質抗體（AE1 ）做免疫染色。
本位 DNA雜化結果顯示16／24生殖疣含HPV6／11， 2／5 生殖器波文氏症含 HPV16／
18，而16例含 HPV16／11之生殖疣中， 4例兼 HPV16／18之感染，波文氏症則均不具
雙重感染。疣之 HPV分佈在表皮上層，而波文氏症則散在整個表皮層。因此，決定表
皮細胞之良性增殖或惡性增殖的因素，可能包括 HPV亞型，亞型間之交互作用柔 HPV
是否存在於增殖細胞。生殖疣之 HPV存在於細胞核及細胞質顯示 HPV生命週期中，會
經過細胞質，也顯示此法可能比血清學方法敏感。
以PdMMTneo-HPV16 head to tail dimer 轉化人正常角質細胞，得到的細胞株，具有
：極長的壽命（大於1 年8 個月）、染色體數目異常、可由單一細胞immortalizaton
。病毒 DNA在細胞株內，以嵌合方式存在，嵌合隨細胞培養時間而改變，其
RNA在1.8Kb的主要transcript含有E2及E6／E7，我們提 HPV
DNA出之嵌合，可能是immortalization之偶發事件的論點，而支持E6／E7可能為致癌
基因之論點。細胞株之生長需要表皮細胞生長素，顯示 HPV16對細胞週期之G1 early
phase 無影響；而生長需要羥基可體松，顯示 HPV16之goucocortaicoid responding
element 可能對immortalization 重要。由Keratin 19（AE1-40Kd keratin）量之增
加，顯示 HPV16會造成Keratin 19製造之增加或失控，由於此現象與Ad12-SV40 轉化
及SV40轉化之角質細胞株相似。我們提出 HPV16、Adenovirus及SV40對表皮細胞之de
-differentiation可能經由相似機轉造成之假說。

目錄
緒言
第一章　生殖器疣及生殖器波文氏症之人類乳頭狀瘤病毒去氧核醣核醣核酸之亞型、分佈及位置－以本位去氧核醣核酸雜化法偵測
第二章　以HPV16去氧核醣核酸轉化之人類角質細胞株之設定
第三章　以人類乳頭狀瘤病毒16去氧核醣核酸轉化之人類角質細胞株之病毒DNA，RNA之探討
第四章　人類乳頭狀瘤病毒16去氧核醣核酸轉化之人類角質質細胞對荷爾蒙之生長需求
第五章　人類乳頭狀瘤病毒16可造成K19角質製造增加或失控
參考文獻
摘要