|
為膫解新城憐瘟病毒(Newcastle disease virus) 強毒株 691036的 F/HN 基因邊界 (gene boundary) 之結構。應用純化病毒RNA 及人工合成之病毒特異性引子(comple- mentary DNA ;cDNA),結果得到 500bp至 9kb不等的 cDNA 片段,將其作為進行聚合 連鎖反應(Polymerase Chain Reaction,PCR) 之模板(template)。接著再以 F/ HN 基因邊界兩端核 酸序列,作為進行 PCR增幅 (amplification)該片段之引子,合成 出 F/HN 基因邊界。再選其中間二十個核 酸序列,作為探針,經Southern blot h- ybridization證實該PCR 增幅產物為F/HN基因之片段。 F/HN基因之片段經 PCR大量增幅後,使用Qiagen-column 純化該片段,選殖入pBlue- scriptⅡ KS 載體,以限制 切割篩選白色 菌落,只得一株陽性菌落,將其大量培 養後,萃取其質體DNA ,再以CsCl-EtBr 梯度高速遠心純化質體DNA ,取134ng pla- smid DNA經 Apa I限制 切割和未切割,分別進行 0、10、15、20、25、30、35個P- CR循環反應,結果顯示各於10個及15個循環之PCR 反就見其增幅產物。
|