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聚合繪連鎖反應(polymerase chain reaction; PCR)一種具有高靈敏度及高特祑性的 DNA 復制技術。它主要是藉著聚合繪在一對方向相反的引子(primer)協助下,將兩個 引子間特定的DNA 序列反覆復制, 不僅原來的DNA 能拿來當模板(template),新合成 的DNA 也可用為模板, 於DNA 復制的過程中, 以原來DNA 做模板復制之DNA 會較兩引 子間距長, 此產物稱為long product而以新合成的DNA 為模板復制出之DNA 與兩引子 間距等長, 此產物稱為short product , 其中long product以等差級數增加, short product 以幾何級數增加(Oste, 1988)。大體而言,復制的速率是以幾何級數的方式 增加,通常經過20次循環作用, 理論上目標DNA (target DNA)會增加百萬倍(220) , 故可利用PCR 的特性將小量的DNA 復制為大量的DNA (O量 1988; White, 1989) ,其 應用範圍相當廣,為研究基礎科學及臨床應用之學者所熱衷使用的方法。 利用聚合繪連鎖反應來偵測豬水謥病毒較一般傳統檢驗方式快速且靈敏,很適合應用 於田間樣品的大量篩選。本實驗針對豬水謥病毒基因組設計了5 對一次引子(set VP1 , VP2, VP3, P11, Pol) 及2 對巢式引子(set Pol-1,P111)於不同的聚合繪反應條件 下皆可得到特異性高的PCR 產物。一次引子的靈敏度約可偵測到10 -10 TCID ,如 再經巢式引子作用,則偵測能力可提高10 -10 倍。 本實驗不僅可偵測到組織培養中的豬水謥病毒顆粒,并可偵測到來自田間樣品內的病 毒顆粒。從田間樣品采樣后,經聚合繪連鎖反應至得到偵測結果僅需5 個小時。整個 操作過程容易且所需之食品設備少,很適合養豬業者自行篩選田間樣品,應可提早發 現病毒感染之豬只,并減少病毒蔓延之機會。
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