跳到主要內容

臺灣博碩士論文加值系統

(18.97.9.172) 您好!臺灣時間:2025/02/18 04:54
字體大小: 字級放大   字級縮小   預設字形  
回查詢結果 :::

詳目顯示

我願授權國圖
: 
twitterline
研究生:鄭金松
研究生(外文):ZHENG,JIN-SONG
論文名稱:B型肝炎病毒之體外複製及其核套構造之分析
論文名稱(外文):Production of hepatitis B virus in vitro & structural analyses of its nucleocapsid
指導教授:張仲明
指導教授(外文):ZHANG,ZHONG-MING
學位類別:博士
校院名稱:國立陽明大學
系所名稱:微生物研究所
學門:生命科學學門
學類:微生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1991
畢業學年度:79
語文別:中文
論文頁數:115
中文關鍵詞:B 型肝炎病毒體外複製核套構造肝 細胞株表面抗原核心相關抗原聚合蛋白激
相關次數:
  • 被引用被引用:3
  • 點閱點閱:185
  • 評分評分:
  • 下載下載:0
  • 收藏至我的研究室書目清單書目收藏:1
以選殖的B 型肝炎病毒(HBV) DNA 轉染到肝癌細胞株, 發現在高度分化的肝癌細胞株
能分泌大量的B 型肝炎表面抗原(HBsAg) 及核心相關抗原,HBc/HBeAg 。此兩種抗原
在HuH-7 肝癌細胞株的表現量最高且持續25天之久。以型態,浮力密度鑒定分析及p-
reS1表面抗原之存在,證實轉染后的HuH-7 細胞株會產生類B 型肝炎病毒顆粒。由於
這些類病毒顆粒含有聚合繪及蛋白激繪活懷且其病毒基因體限制繪圖譜(restriction
map)與用以轉染的HBV DNA 相同, 顯示其與天然產生的病毒具相同之性質。以抗X 基
因產物抗血清亦可鑒定到17 kDa及22 kDa的蛋白質。所以,四個HBV 的開放編閱結構
(open reading frame)在此組織培養系統均可測到其產物且有病毒顆粒及大量之核心
顆粒分泌到細胞培養液。故此系統可提供新的模式來研究病毒之組合及其他相關問題

對於HBV 病毒顆粒的組合迄今仍所知有限。故本實驗利用此研究模式探討HBV 核心顆
粒之穩定性及其組成物相互間之作用。結果發現釋放到細胞外核心顆粒之HBcAg 以雙
硫鍵形成寡聚體(oligomers) ,而細胞內核心顆粒之HBcAg 則沒有雙硫鍵之形成。進
而以pH7.5, pH10, 3 M NaCl 及4 M 尿素處理核心顆粒, 發現含雙硫鍵的細胞外核心
顆粒比細胞內核心顆粒穩定。由這些結果顯示,雙硫鍵之形成對病毒核心顆粒構造的
完整性非常重要。
由於HBV 以內部起始之方式來轉譯其聚合繪, 此與反轉錄病毒產生核心- 聚合繪融合
蛋白之機轉不同。故HBV 聚合繪之包裹不像反轉錄病毒直接利用融合蛋白將聚合繪包
進核內。為了研究HBV 聚合繪之包裹,本論文首先探究核心顆粒內聚合繪與其他組成
物之間是否有交互作用。結果顯示P 基因產物以非共價鍵之方式與核心顆粒內之HBc-
Ag直接緊密的形成復合體,此復合體即使在0.5% SDS存在下, 仍結合在一起。此外,
我們發現HBxAg 亦存在於核心顆粒內。進一步以遺傳法分析,證實P 基因產物與HBc-
Ag的結合性具遺傳及免疫的專一性。這些結果推測HBV 聚合繪包裹之機轉可能為透過
聚合繪與HBcAg 之交互作用組合而成。
同時,本研究亦發現核心顆粒以未知的分泌途徑釋放到細胞培養液中,由pulse and
chase 的分析結果顯示核心顆粒之分泌速率比HBsAg 慢,其分泌半生期(t )大於24
小時。因此,此系統提供一個新的模式來研究非傳統性蛋白質分泌途徑之機轉。
目錄
中文摘要
英文摘要
壹 緒論
貳 材料與方法
一 細胞培養
二 質體
三 大腸桿菌之轉形
四 質體的製備
五 DNA轉染實驗(DNA transfection)
六 RNA的抽取
七 Northern及southern雜化分析
八 放射免疫沈澱分析及SDS-聚丙烯醯胺膠體電泳
九 抗體
十 HBV病毒顆粒的部份純化
十一 氯化銫密度階梯離心術
十二 HBV DNA內在聚合 活性的分析
十三 蛋白質體外的磷酸化
十四 S1酵素分析
十五 體外轉錄及轉譯
十六 電子顯微鏡術
參 結果
一 HVB轉染人類肝癌細胞株後其基因之過渡表現
二 HBV DNA轉染HuH-7細胞株所分泌的HBSAg及HBeAg之動學分析
三 密度階梯及電子顯微鏡分析HuH-7細胞分泌的類病毒顆粒
四 類HBV病毒顆粒dna之限制 分析
五 HBV所編譯的蛋白質分析
六 HBV核心顆粒之蛋白組成
七 pMH3/3097轉染後產生之病毒顆粒其DNA基因體的分析
八 病毒核心顆粒內之P ORF產物以非共價鍵方式與HBcAg交互作用
九 病毒核心顆粒之HBcAg以隻硫鍵形成寡聚體
十 無雙硫鍵鍵結的病毒核心顆粒導致其穩定性降低
十一 P PRF產物與HBcAg直接結合在一起
十二 X抗原亦存在於核心顆粒內但不與核心抗原形成強結合力之複合物
十三 核心顆粒從細胞釋放的機轉
肆 討論
一 HBV在體外的複製
二 核心顆粒之核心抗原形成雙硫鍵的重要性
三 核心顆粒的組合、分泌及其激的來源
四 pMH3/3097病毒顆粒產生線型基因體之機轉
五 核套(nucleocapsid)組成物之包裡及其在核套內的相互關係
五 參考文獻
六 圖表
七 附錄
ABSTRACT(IN CHINESE)
ABSTRACT(IN ENGLISH)
ACKNOWLEDGEMENT
TABLE OF CONTENTS
LIST OF FIGURES
LIST OF TABLES
1. INTRODUCTION
1.1 Why Resource Relocation Problems
1.2 Overview of Main Results
2. PROBLEM FORMULATION AND SURVEY OF RELATED WORK
2.1 Preliminaries and Formal Model
2.2 conventional Resource-Constrained Scheduling Problems
2.3 Kaplan and Amir''s Algorithm
2.4 Relocation Problems with Multiple Machines
3. GENERATING THE BEST K SEQUENCES
3.1 Preliminaries
3.2 Basic Properties
3.3 the Generating Algorithm
3.4 Conclusions
4. RELOCATION PROBLEMS WITH PRECEDENCE CONSTRAINTS
4.1 General Study
4.2 three Fundamental Cases
4.3 Algorithm for Inforests
4.4 Algorithm for Outforests
4.5 Conclusions
5. RELOCATION PROBLEMS WITH PROCESSING TIMES AND DEADLINES
5.1 Introduction
5.2 NP-hardness
5.3 Algorithm FIXED_REQ
5.4 Algorithm TWO _DEADLINES
5.5 Conclusions
6. MINIMIZATION PROBLEMS UNDER A COMMON DUE-DATE
6.1 Introduction
6.2 NP-hardness and Polynomial solvability
6.3 Branch-and-Bound Algorithm for RPNC
6.4 Conclusions
7. CONCLUDING REMARKS AND FURTHER STUDIES
7.1 Conclusions
7.2 further Studies
Appendix: RP WITH HETEROGENEOUS RESOURCES
BIBLIOGRAPHY
VITA
INDEX
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
第一頁 上一頁 下一頁 最後一頁 top