在過去的研究資料中顯示核糖體的表面不是非常的平滑,而是如山壑般起伏,而一個 物體,越是曝露於表面或結構越疏松的部分就越容易被標志。基於這個概念,我們利 用生物素對核糖體作不同程度之標志,應可分析鑒別核糖體表面之勝踽分布以及單一 蛋白之結構(那些勝踽位於表面,那些結構較疏松)。 由於核糖體是一個巨大而復雜之分子,我們無法同時對整個核糖體表面勝踽進行研究 ,所以我們必需將核糖體蛋白單離出來,再對此單一蛋白之勝踽片段進行研究。目前 我們已利用不同濃度之生物素對大腸杆菌核糖體進行了不同程度之標志,并單離出不 同程度之生物素標志之核糖體蛋白S12 ,利用蛋白水解酵素Chymotrypsin進行水解, 以薄層色層分析法(TLC) 展開,利用Avidinperoxidase偵測那些勝踽片段已被生物素 標志。但因TLC-plate 對勝踽結合力較弱,在一連串處理過程中可能已大量流失,致 使我們看不到任何結果。我們一方面提高蛋白質用量,另一方面改用Avidin-1 作 為偵測物,目前本實驗正在進行中,預期不久即可分析出S12 勝踽片斷被生物紗標志 程度之差異。進一步我們希望結合核糖體重組技術及電子顯微鏡技術,以確定這些勝 踽片段在核糖體表面之分布。 另外我們也測試了不同程度生物素標志之核糖體活性,發現確實有差異,將來我們希 望結合核糖體重組技術對單一蛋白之功能進行研究。 我們相信利用生物素標志法將可在核糖體結構及功能之研究上提供一個更簡便精細之 研究模式。
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