臺灣博碩士論文加值系統

a 型腫瘤壞死因子(tumor mecrosis factor a ;TNF- a) 以及I 型介白
質(interleukin-1;IL-1)被認為是造成類風濕性關節炎之關節發炎和破壞的兩種重要
介質(mediators) 。而低劑量胺甲基葉酸(methotrexate; MTX) 對類風濕性關節炎具
有顯著的療效，唯其作用機序是否和這兩種細胞激活素(cytokines) 的調節有關仍未
清楚。但Segal 實驗室發現MTX 對於IL-1的合成和分泌並無抑制作用。為探討MTX 的
作用機轉是否與TNF-a 的調節有關，本實驗評估MTX 對於TNF-a 之製造和活性的影響
，而其它和MTX 同樣對於HL-60 細胞有誘發成熟分化作用的細胞分化
劑(cytodifferentiation agents)諸如retinoic acid(Ra) 、sodium butyrate(SB)
和hexamethhylene bisacetamide(HMBA) 也首次本研究中探討其對於TNF-a 調節的作
用。首先利用經修飾後的L929 cytotoxicity-MTT stain bioassay system ，探討脂
多醣(lipopolysa-ccharide;LPS) 、PMA 、PWM 、Con A 、MTX 和Ra、SB、HMBA等對
於誘發人類黏著單核細胞(adherent mononuclear cells;AMC)分泌TNF-like factor
的情形。結果MTX 和細胞分化劑份不誘發TNF-like factor 的分泌，而LPS 和各細胞
分裂素則具有誘發TNF-like L929 Cytotoxic factor的作用。經由Anti-TNF-a，而各
細胞分裂素所誘生的物質除TNF-like factor 為同質的TNF-a ，而各細胞分裂素所誘
生的物質除TNF-a 外，尚有其它具有似TNF 活性的因子存在。就濃度而言，LPS 的誘
發效應較其它細胞分裂素要來得強。其次以LPS 活化之人類AMC 為標的細胞，進一步
探討MTX 和細胞分化劑對於TNF-a 之製造和活性的影響。MTX(1 ng/ml∼1mg/ml)
、Ra(0.5uM∼80uM) 以及SB(5ug/ml∼400ug/ml)對於LPS-accivated AMC 其TNF-a 的
製和生物活性皆無抑製作用。而HMBA(10uM∼80uM)和高濃度的SB(800ug/ml)則具有明
顯的抑制作用。有趣的是，HMBA也具有阻抑LPS 活化單核球的作用。以往文獻上利
用mu-rine L929 transformed fibroblast cells 結合tetrazolium salt(MTT) 染色
法分析TNF-a 的活性時，其實驗結果平均值的標準誤差(standard error of sample
mean;SEM) 常達10% 左右，經我們修飾後的方法以及適當Formazan crystal溶解液的
選取，使SEM 已低於5%以下(平均2∼3%) ，而且可立即判讀，因此對於分析或定
量TNF-a 活性或濃度的測量上將提升不少助益。