本試驗利用聚合連鎖反應的技術，自六個來源不同的蘇力菌種中，分離出多個殺
蟲晶體蛋白基因。這些自聚合連鎖反應所分離的殺蟲晶體蛋白基因，可直接選殖
到含有相對切位的pUNG載體之上。經選殖後得到合蘇力菌殺蟲晶體蛋白基因的表現
載體，有pUN-BT、pUN-A、pUN-S、pUN-K、pUNB 及pUN-D 等。這些表現載體，僅含
殺蟲晶體蛋白基因的Ｎ端約1 至650 胺基酸的毒蛋白基因部分，與載體的1ac 基因
可形成融合蛋白質，因此可利用上游的1ac 啟動子，進行基因之表現。這些含表現
載體的大腸桿菌，利用小菜蛾進行生物毒性測試，結果均表現殺蟲之活性。此結果
說明經由聚合連鎖反應所分離到的DNA 片段，在大腸桿菌中可表現殺蟲的效果。
利用聚合連鎖反應分離殺蟲晶體蛋白基因的最終目的，是要構築一含有殺蟲晶體
蛋白基因的植物表現載體，作為育成抗蟲轉殖植物之用。由前人研究之結果，得知
自第一個胺基酸至第650 胺基酸間的毒蛋白基因在植物中表現較好。因此，本試驗
所使用的引子中，在5'端的引子設計含有第一個起始密碼子的NcoI (CCATGG) ，3'
端的引子則設計在第650 個胺基酸附近，並在其後加入一終止密碼子SstI切位。以
此等引子所合成的DNA 片段，即可直接且正確地選殖入含有NcoI及SstI切位的載體
上。本試驗已成功地把自聚合連鎖反應分離出來，並在大腸桿菌表現殺蟲活性的
基因片段，選殖到pBI121之上，而得含有cryIA(b)基因的植物表現載體pBt121N 及
pBt121-NR 。這些含有殺蟲晶體蛋白基因的植物表現載體，經由農桿菌之基因轉殖
技術，已成功轉入菸草染色體中。經農桿菌感染後具Kanamycin 抗性的菸草，利用
聚合連鎖反應及南方墨點法，均可偵測到具有殺蟲晶體蛋白基因。
把具有殺小菜蛾的cryIA(b)殺蟲晶體蛋白基因轉入十字花科作物（如青花菜），是
本研究之長遠目標。為達到基因轉殖青花菜後之篩選及再生之目標，需建立青花菜
之有效再生系統及對Kanamycin 敏感性之測試資料。本試驗結果顯示，栽培品種緣
王及翠光播種後三天的下胚軸再生最好。培養基以2ppm BA 及0-1 ppm NAA 對青花
菜下胚軸之再生率 50-75﹪最高。而對於kanamycin 敏感性測試之結果，顯示Kan-
amycin濃度升高至50 ppm時，下胚軸就不再有癒合組織產生。本試驗於是用綠王品
種播種後三天的下胚軸，做為轉殖cryIA(b)基因的材料，並以100 ppm的Kanamycin
篩選基因轉殖成功的青花菜。然而經過多次不斷的嘗試，尚未有具體成果，有待進
一步研究。
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