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研究生:唐光生
研究生(外文):TANG, GUANG-SHENG
論文名稱:鏈激�t單株抗體之研究與應用
論文名稱(外文):Characterization and application of monoclonal antibodies against streptokinase
指導教授:吳華林
指導教授(外文):WU, HUA-LIN
學位類別:碩士
校院名稱:國立成功大學
系所名稱:生物化學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1992
畢業學年度:80
語文別:中文
論文頁數:101
中文關鍵詞:鏈激單株抗體鏈球菌
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在人體血液中,血纖維蛋白溶原(Plasmingogen, Plg) 可由鏈激(SK)、尿激
(UK)、及組織型血纖維蛋白溶原活化因子(tPA) ,活化成為血纖維蛋白溶(Pl-
asmin, Plm) 而將血纖維蛋白(Fibrin)溶解。
鏈激是目前應用最廣的血栓溶解製劑,由鏈球菌(Streptococcus) 所分泌,其構
造是由415 個胺基酸所組成,無多醣及雙硫鍵之單純多胜鍵。鏈激並非是蛋白水
解,其必須與血纖維蛋白溶原形成1:1等莫耳複合物,才能將血纖維蛋白溶
原(Plg) 活化成為血纖維蛋白溶(plm) ,促成血栓溶解。
在polyethylene glycol (PEG) 的幫助下,經鏈激刺激產生免疫反應的小白鼠脾
臟細胞與NS-1細胞完成細胞融合,再經由擇生篩選(Screening),單株化(Cloning)
等步驟,共得到10種單株抗體,其抗體亞型(subclass)八種為IgG,兩株為IgM,
並將所獲得之單株化細胞打入小白鼠腹腔中,產生腹水,再經由硫酸胺沈澱後,以
protein A 層析管柱純化 IgG或以Sephadex G-200及Rabbit anti-mouse IgM 之
層析管柱純化IgM ,經SDS-PAGE電泳分析,皆可得到高純度之抗體。此十株抗體對
於Trypsin,Chymotrypsin,tPA及Plasmin 四種serine proteases並無免疫交叉反
應(Immunocross reaction)。其中八株 IgG可抑制鏈激活化人類血纖維蛋白溶
原之作用,而另外兩株IgM 則無抑制作用。而以固定化pepsin凝膠切割 IgG(
SKMb215),可得(Fab) 片斷,此片斷亦可抑制鏈激活化人類血纖維蛋白溶原
之作用。同時 IgG(SKMb215) 也可抑制原SK.H plg 複合體(鏈激與人類血纖
維蛋白溶原複合體)活化牛類血纖維蛋白溶原。
將鏈激經CNBr及固定化 Plasmin 切割後,由 Western Blotting 及 Iodine 125
binding assay 分析發現,此十株抗體僅對鏈激大片段(如38 KD, 30KD )有結
合作用。以競爭性ELISA 測定單株抗體抗原決定基(epitope) 之異同,共得到三組
不同抗原決定基的抗體,一組為SKMb40,SKMb43,一組為SKMb215,SKMb235另一組
為其餘六株。將單株抗體製成親和性管柱,可純化出Native SK ,鏈球菌所分泌之
SK及由E. Coli 基因工程方法將其改變所分泌之SK。

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